Q-瓊脂糖凝膠HP由專業(yè)試劑供應(yīng)商北京百奧萊博提供，僅用于生物化學(xué)研究方面，本產(chǎn)品質(zhì)量好，且具價(jià)格，深為用戶稱道，了解更多Q-瓊脂糖凝膠HP等分離試劑類產(chǎn)品請聯(lián)系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括Q-瓊脂糖凝膠HP在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：Q-瓊脂糖凝膠HP
英文名稱：Q-Sepharose HP
產(chǎn)品貨號：QN4080
產(chǎn)品規(guī)格：100ml

Q-瓊脂糖凝膠HP是將季銨基團(tuán)鍵合在瓊脂糖微球上形成的一種強(qiáng)陰離子交換介質(zhì)。具有高分辨率，高載量，回收率高和再生能力強(qiáng)等特點(diǎn)。化學(xué)穩(wěn)定性好，可用氫氧化鈉在位清洗。基質(zhì)的親水特性保證在洗脫過程中減少細(xì)胞衍生雜質(zhì)的非特異性吸附。可用于蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。


基質(zhì)：6%交聯(lián)瓊脂糖凝膠
配基：季銨
交換基團(tuán)：-N+(CH3)3
離子容量：0.14～0.20mmol Cl-/mL
顆粒大小：34μm
蛋白載量：10mg lgG，24mg HAS/mL
工作pH：1～14(短時(shí)間，在位清洗)；2～12(長時(shí)間)
化學(xué)穩(wěn)定性：在以下溶液中穩(wěn)定1mol/L NaOH；8mol/L尿素；6mol/L鹽酸胍；30%異丙醇；70%乙醇；30%SDS，30%乙腈
儲存條件：4～28℃

使用方法：
1．裝柱
① 將所有的試劑和填料達(dá)到室溫，配制初始緩沖液(平衡液)和緩沖液。
② 根據(jù)柱子大小取所需凝膠的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠:緩沖液=3:1比例）配成勻漿。
③ 將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液體（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無氣泡。
④ 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意不要使用氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
⑤ 打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2～3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2．平衡
  讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如：Tris、PBS等。
3．上樣
① 樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心、過濾后上柱；
② 一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡洗液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
③ 介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動相的離子強(qiáng)度和pH值。鹽濃度越小，介質(zhì)對組分吸附越牢。
4．洗脫
  Q瓊脂糖凝膠介質(zhì)可用增大鹽濃度或減小pH值進(jìn)行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。
5．再生
  一般用高鹽濃度的緩沖液（含1～2mol/L NaCl）洗或減小pH洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
  若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6．在位清洗
① 對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M NaCl去除。
② 對沉淀蛋白、以疏水作用結(jié)合的蛋白或者脂類物質(zhì)，可用1M NaOH去除。
③ 對強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，可用4～10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。
  清洗完畢后，用至少3倍柱體積緩沖液平衡柱子。
7．去熱源
  用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5～6小時(shí)或者用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)。或用以下步驟去除：
① 2倍柱體積的70%的乙醇；
② 2倍柱體積50mM Tris-HCl pH7.5
③ 1倍柱體積4M尿素
④ 3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M NaCl;
  以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。
8.消毒
  用0.5～1.0M NaOH室溫下洗8-10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。

注意事項(xiàng)：
1．密封貯存于4～28℃（保存溶液為20%乙醇），通風(fēng)、干燥的地方，不能冷凍。用過的柱子貯存于4℃（20%乙醇）。
2．在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

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儲存條件：室溫干燥保存

名稱：谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P.
貨號：QN4065
規(guī)格：10ml
谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠H.P.用于分離純化谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST）標(biāo)簽蛋白、其它來源的谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶以及和谷胱甘肽具有親和作用的蛋白的親和層析介質(zhì)。pGEX載體表達(dá)的外源蛋白與谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶融合，因此可以通過谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析進(jìn)行純化。GSTs是一類以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作為底物，通過形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST對底物的親和力是亞毫摩爾級的，可以用含游離谷胱甘肽的緩沖液洗脫結(jié)合GST融合蛋白。

產(chǎn)品參數(shù)：
基質(zhì)：6%瓊脂糖凝膠
配基：肝素
顆粒大小：45～165μm
zuì大流速：600cm/h
工作pH：pH3.0～pH12.0
每毫升蛋白結(jié)合量：10mg
操作溫度：室溫
保存條件：貯存于4℃～28℃（保存溶液為20%乙醇）

使用方法：
1．谷胱甘肽樹脂的處理：
① 輕輕顛倒盛有谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂的容器，將樹脂混成勻漿。
② 取部分勻漿放入15mL聚丙烯管（每100mL細(xì)菌培養(yǎng)物大約需要2mL勻漿）。
③ 4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
④ 在樹脂中加入10倍柱床體積預(yù)冷的PBS，顛倒數(shù)次混勻，4℃ 500g離心5分鐘，小心去掉上清。
⑤ 每毫升樹脂加入1毫升冷的PBS，制成50%勻漿，顛倒數(shù)次，混合均勻，懸液冰上放置待用。
2．制備細(xì)胞抽提物：
① 每100毫升培養(yǎng)物的細(xì)胞沉淀重懸于4mL PBS緩沖液中。
② 加入溶菌酶至終濃度為1mg/mL,冰上放置30分鐘。
③ 用針筒將10mL濃度為0.2%的TritonX-100強(qiáng)行注入黏稠的細(xì)胞裂解物中，劇烈振動數(shù)次混勻。加入DNase和RNase至終濃度5μg/mL,4℃振動溫育10分鐘，4℃ 3000 g離心30分鐘，去除不溶性細(xì)胞碎片，上清轉(zhuǎn)移到一只新管中，加入DTT至終濃度1mmol/L。
3．純化融合蛋白：
① 細(xì)胞裂解物與適量50%谷胱甘肽-瓊脂糖樹脂勻漿混和，每100毫升細(xì)菌培養(yǎng)物加2mL樹脂，于室溫輕搖30min。
② 混合物于4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
③ 沉淀中加入10倍柱床體積的冷的PBS，顛倒離心管數(shù)次混勻，洗去未與樹脂結(jié)合的蛋白。
④ 4℃以500g離心5分鐘，小心去掉上清并留樣少許進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。
⑤ 結(jié)合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脫液洗脫，也可用凝血酶、腸激酶或Xa因子切割，釋放靶蛋白。
4．用谷胱甘肽洗脫融合蛋白：
① 沉淀中加入1倍柱床體積的谷胱甘肽洗脫緩沖液，室溫輕輕攪動10min，洗脫樹脂上結(jié)合的蛋白。
② 4℃以500g離心5分鐘，上清（含洗脫的融合蛋白）移至新管中。
③ 重復(fù)步驟5和6兩次，合并3次上清。蛋白酶解從結(jié)合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
④ 在結(jié)合了融合蛋白的樹脂中加入凝血酶、腸激酶或Xa因子（根據(jù)融合蛋白中的位點(diǎn)選擇），每mL樹脂加入50單位溶于1mLPBS的蛋白酶。顛倒離心管數(shù)次混勻，室溫下振蕩2-16小時(shí)。
⑤ 4℃以500g離心5分鐘，上清小心移至新管中。（GST仍結(jié)合在樹脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分離）
⑥ 10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析每一步樣品的蛋白質(zhì)組成。
  試劑配制：谷胱甘肽洗脫緩沖液：10mmol/L還原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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