本試劑盒適用于各種全血樣本中單核細胞提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋...

血液單核細胞蛋白提取試劑盒

 

產品編號：HR0079

產品組成：

儲存條件：

細胞提取液、蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存；有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

產品簡介：

本試劑盒適用于各種全血樣本中單核細胞提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1小時內完成。該試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號試劑盒。也可將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（HR0389）。

產品特點：

● 使用方便，提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

● 提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白提取液含多種有效成分，可充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器 ● PBS ● 蛋白定量試劑盒

血液單核細胞蛋白提取試劑盒使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 新鮮全血樣品按下列步驟操作，已提取的單核細胞樣品從步驟10開始操作。

使用方法：

1. 提取液制備：

按需要提取的樣品數量，每400μL冷的蛋白提取液C 中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取1.5mL新鮮抗凝血，靜置吸去上層血漿。

3. 加入1mL細胞提取液A，輕輕吹打混勻，冰上靜置5分鐘。過程中適當偶爾輕微搖動混合均勻。

4. 在4℃，400-500×g離心5分鐘，棄上清，收集底部細胞沉淀。

5. 在細胞沉淀中加入1mL細胞提取液A，輕輕吹打混勻。

6. 冰上靜置5分鐘，過程中適當偶爾輕微搖動混合均勻。

7. 在4℃，400-500×g離心5分鐘，棄上清，收集底部細胞沉淀。

8. 在細胞沉淀中加入400μL 細胞提取液B，輕輕吹打混勻。

9. 在4℃，1000×g離心5分鐘，棄上清，收集底部細胞沉淀。

10. 在細胞沉淀中加入100-200μL冷的蛋白提取液C，充分混勻。

11. 在4℃條件下振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持提取液輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件的話可以不振蕩，置2-8℃靜置，稍微延長蛋白提取液處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

12. 在4℃，12000g 條件下離心15 分鐘。

13. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到單核細胞總蛋白。

14. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

血液單核細胞蛋白提取試劑盒常見問題分析：

● 蛋白濃度低？

處理樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑B 的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。直至沉淀數量明顯減少。

● 細胞裂解速度慢？

為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用獨特的保護蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應用范圍廣。適當延長裂解的時間即可。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford 法，因為試劑A 中含有干擾Bradford 法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford 法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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