組織/細胞質蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從細胞和動物組織制備胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1 小時內完成。制備的胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研...

組織/細胞質蛋白提取試劑盒

 

產品編號：HR0023

產品組成：

組織/細胞質蛋白提取試劑盒儲存條件：

蛋白提取液、磷酸酶抑制劑2-8℃保存，蛋白酶抑制劑-20℃保存，有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

產品說明：

組織/細胞質蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從細胞和動物組織制備胞漿蛋白。提取過程簡單方便，可在1 小時內完成。制備的胞漿蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和，需要根據實際樣本情況優化裂解時間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒（相關產品HR0165）。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產品HR0389）。

產品特點：

● 使用方便，從細胞/組織提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

● 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

適用樣本：

● 細胞 ● 組織

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿器/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● 移液器

● PBS ● 蛋白定量試劑盒

組織/細胞質蛋白提取試劑盒使用注意事項：

● 預實驗很重要。必須要做預實驗，在正式實驗之前取少量樣本優化實驗條件，并像正式樣本一樣認真進行，看實驗結果是否可行，實驗條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實驗條件通常差異較大，同種細胞的不同模型下需要的實驗條件也可能不同，為了避免浪費正式樣本和試劑，一定要提前預實驗優化實驗條件。

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 如果試劑盒不能短時間用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

細胞胞漿蛋白提取：

1、提取液制備：

每500μL冷的胞質蛋白提取液A 加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑，充分混勻。

【注】：

● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取5-10×10⁶個細胞，在4℃，500×g力條件下離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。

3、用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、每20μL體積細胞沉淀（約20mg，2×10⁶個細胞）中加入150-200μL冷的提取液A，高速渦旋振蕩混勻或吹打混勻，置2-8℃條件振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 提取液A處理后細胞體積應減少，否則延長提取液A振蕩處理時間。

● 根據預實驗結果，可以稍微減少試劑A的用量，以提高獲得的胞漿蛋白樣品的濃度。

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

5、然后在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。

6、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞質蛋白。

7、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

組織胞漿蛋白提取：

1、提取液制備：

每500μL冷的胞漿蛋白提取液A加入2μL蛋白酶抑制劑混合物和2μL磷酸酶抑制劑，充分混勻。

【注】：

● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。磷酸酶抑制劑可以一次加入。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2、取適量組織樣本用手術剪刀盡可能剪碎，每20mg組織中加入150-200μL冷的提取液A，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。

3、將勻漿液吸出，置2-8℃條件振蕩20-30分鐘。

【注】：

● 提取液A處理后細胞體積應減少，否則延長提取液A振蕩處理時間。

● 根據預實驗結果，可以稍微減少試劑A的用量，以提高獲得的胞漿蛋白樣品的濃度。

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，稍微延長提取液的處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

4、再次高速渦旋振蕩5秒，然后在4℃，12000×g力條件下離心10分鐘。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到胞質蛋白。

6、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

常見問題分析：

● 蛋白濃度低？

處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 細胞裂解速度慢？

為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用獨特的保護蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應用范圍廣。適當延長裂解的時間即可。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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