Hoechst33258染色試劑盒可用于細胞凋亡檢測，也可用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA 染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測或流式細胞儀檢測。...

Hoechst33258染色試劑盒

 

產品編號：HR0459

產品組成：

Hoechst33258染色試劑盒儲存條件：

染液2-8℃避光保存。長期保存-20℃避光保存。試劑B 2-8℃保存。有效期6個月。

產品簡介：

Hoechst33258染色試劑盒可用于細胞凋亡檢測，也可用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA 染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測或流式細胞儀檢測。

Hoechst 33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。Hoechst 33258能少許進入正常細胞膜，使其染上低藍色，而凋亡細胞的膜通透性增強，因此進入凋亡細胞中的Hoechst 33258比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA 的結構發生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結合，并且凋亡細胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst 33258排出到細胞外使之在細胞內積累增加等都使凋亡細胞的藍色熒光增強。Hoechst 33258的最大激發波長為346nm，最大發射波長為460nm；Hoechst 33258和雙鏈DNA結合后，最大激發波長為352nm，最大發射波長為461nm。本Hoechst 33258染色試劑盒可直接用于活細胞或組織的細胞核染色，也可用于固定細胞或組織的細胞核染色。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦 ● 移液器 ● 離心機 ● PBS或HBSS ● 4%多聚甲醛

注意事項：

● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。

● 染色后立即進行分析。

● 染色時間根據不同樣本的實際染色結果做相應調整。

● 本染色液可用于培養細胞、細胞涂片、石蠟切片、冰凍切片的檢測。石蠟切片用常規方法脫蠟、分化，冰凍切片用冰丙酮固定后檢測。

● 根據樣本情況和下游的檢測儀器選擇合適的染色方法，只要在染色時染色工作液能充分覆蓋細胞樣本即可。

● 活細胞原位染色可能需要較長時間，可將染液加入培養基后避光孵育1-2小時，或更長時間。

● 以下以培養細胞的涂片的熒光顯微鏡為例，細胞染色不需要固定，也可以固定后染色，其他方法請參閱相關資料。

Hoechst33258染色試劑盒使用方法：

1、染色工作液的配制：

根據樣品數用 PBS將Hoechst33258染色液10-100倍稀釋，配制成染色工作液。

2、細胞涂片的制備：

貼壁細胞，可將蓋玻片放于培養器皿中，讓培養細胞長于玻片上，然后用藥物誘導細胞凋亡后取出，用4%多聚甲醛固定5min。也可其他方式培養后收集細胞制作涂片檢測。

對于懸浮細胞，用藥物誘導細胞凋亡后，500-1000×g離心5分鐘收集細胞，用PBS洗2次，收集調整細胞數為1×10⁵/mL，涂片或用離心涂片，用4%多聚甲醛固定5min；

【注】：

● 也可不固定，直接染色，稍微延長染色時間。

3、用PBS洗滌涂片兩次。

4、加適量染色工作液于涂片上，室溫避光染色5-20分鐘。

5、用純水10倍稀釋的試劑B洗滌涂片。

6、用熒光顯微鏡檢測結果。染料-DNA復合物的最大激發波長為352nm，最大發射波長為461nm。

結果分析：

Hoechst 33258染色后，置于熒光顯微鏡下，選用340-350nm的激發光觀察：

正常細胞的細胞核呈彌散均勻藍色熒光，凋亡細胞核或細胞質內可見濃染致密的顆粒塊狀藍色熒光，顏色有些發白。如果見到3個或3個以上的DNA熒光碎片被認為是凋亡細胞。

如果您覺得“HR0459 Hoechst33258染色試劑盒”描述資料不夠齊全，請聯系我們獲取詳細資料。(聯系時請告訴我從給覽網看到的，我們將給您最大優惠！)
本頁鏈接：http://www.okbaiwei.com/com_bjbiolab/sell/itemid-9455474.html
已經有861位訪客查看了本頁.