細胞的生長、發育、分化及代謝狀態和外界細胞因子、炎癥介質反應等均可以影響細胞粘附，細胞粘附也可能是腫瘤細胞易發生浸潤、轉移等現象的分子基礎。細胞粘附檢測試劑盒含全套試劑，通過活細胞綠色熒光探針C01染色粘附的活細胞數量來反應細胞的粘附能力變化。激發和發射波長分別為488nm和520nm。...

細胞粘附檢測試劑盒(C01綠色熒光)

 

產品編號：HR8258

產品組成：

儲存條件：

包被液、洗滌液4℃；染色液開蓋后2-8℃避光，長期不用-20℃避光。有效期1年。

【注】：

● 試劑A為無菌溶液，注意防止污染。

● 試劑B注意防潮；避免反復凍融。

● 染色液B為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否則容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

● 試劑拆封后請盡快使用完。

細胞粘附檢測試劑盒(C01綠色熒光)產品簡介：

細胞粘附是指細胞與細胞之間及細胞與細胞外基質之間的粘附，細胞粘附是細胞維持形態結構與功能的生物現象，是細胞間信息交流的一種形式。而信息交流的可溶遞質稱細胞粘附分子(cell dhesion molecμLe,CAM)。細胞粘附分子是參與細胞與細胞之間及細胞與細胞外基質之間相互作用的分子。 是一類獨立的分子結構，是通過識別與其粘附的特異性受體而發生相互間的粘附現象。

細胞的生長、發育、分化及代謝狀態和外界細胞因子、炎癥介質反應等均可以影響細胞粘附，細胞粘附也可能是腫瘤細胞易發生浸潤、轉移等現象的分子基礎。

細胞粘附檢測試劑盒含全套試劑，通過活細胞綠色熒光探針C01染色粘附的活細胞數量來反應細胞的粘附能力變化。激發和發射波長分別為488nm和520nm。

本試劑盒含有包被液，使用方便快速，可以進行高通量檢測。本試劑盒使用熒光法進行檢測，如果需要比色法檢測的，請選用我公司貨號為HR0957的試劑盒。

產品特點：

● 方便：可用熒光顯微鏡、激光共聚焦、熒光酶標儀檢測；

● 快速：最快1小時內即可完成實驗；

● 靈敏：數據可靠，重現性好，線性范圍更寬；

● 準確：試劑本身穩定性高，實驗結果穩定可靠。

檢測方法：

● 熒光顯微鏡 ● 熒光酶標儀 ● 激光共聚焦

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光酶標儀 ● 離心機 ● 移液器 ● PBS或者HBSS（無酚紅）

● 熒光檢測專用的透明底黑色96孔板

使用注意事項：

● 預實驗很重要。必須要做預實驗，在正式實驗之前取少量樣本優化實驗條件，并像正式樣本一樣認真進行，看實驗結果是否可行，實驗條件是否適合自己的樣本。由于生物樣本的多樣性，不同樣本的實驗條件通常差異較大，同種細胞的不同模型下需要的實驗條件也可能不同，為了避免浪費正式樣本和試劑，一定要提前預實驗優化實驗條件。

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導致試劑量不夠用。

● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。

● 染色培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入染色液B。

● 有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加染色液B試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基液面下加，容易產生氣泡，會干擾F值讀數。

● 染色液B為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否則容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

● 由于試劑B的工作液穩定性比較差，染色工作液必須現配現用，并且在當天用完。

● 試劑B對濕度非常敏感，試劑B溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根據單次用量，分裝密閉保存。不可使用含水的吸頭。

● 試劑B母液請擰緊螺旋蓋，避免受潮失效。

細胞粘附檢測試劑盒(C01綠色熒光)使用方法：

包被：

1、96孔板每孔加入100μL包被液。

2、將培養板置2-8℃過夜。

3、移除包被液。

4、干燥培養器皿。通風櫥內吹風數分鐘即可完成干燥，至肉眼觀察完全干燥。

5、用洗滌液洗滌1-3次。

細胞接種：

1、待測定細胞處理好后，用胰酶消化，PBS洗滌，然后用相應培養基重懸，制成細胞懸液。

2、按5×10⁴細胞/孔接種96孔板，建議設3-5個復孔。同時設立對照組，即孵育后不棄上清組。

3、放37℃培養箱孵育30分鐘-1小時。

4、取出培養板，吸棄培養基。

【注】：

●對照孔培養基不要吸除。

5、然后用相應的培養基洗滌2-3次。

【注】：

● 由于培養基中的血清等可能含有酯酶，導致C01細胞活性探針分解，會導致空白上升，所以需要用PBS洗滌數次直到完全洗凈。

6、每孔加入100μL新鮮無血清培養基。

粘附率檢測：

1、染色工作液的配制：

從冰箱中取出熒光染色試劑，室溫溶解后混勻。

根據樣品數按下列比例配制染色工作液。

用37℃培養箱預熱緩沖液(如HBSS)或無血清培養基將 C01熒光染料10-50倍稀釋，配制成染色工作液。

【注】：

● 建議收到產品后，根據單次使用量，對母液進行小量分裝，每次使用一管，試劑-20℃避光凍存，一年穩定。

● 工作液現配現用。

● 為了降低探針加載過度可能引起的假陽性，建議在不影響染色效果的情況下盡量使用低濃度。

● 若細胞在染色后于不含染料的培養基中孵育，熒光信號會衰減。

2、96孔板每孔加入10μL細胞染色液B工作液，37℃避光孵育15-30分鐘。

3、加入100μL HBSS或無血清培養基。

4、用熒光酶標儀/激光共聚焦檢測結果。最大激發波長488nm，最大發射波長分別為520nm。

5、細胞粘附率計算。

將各測試孔的熒光強度值減去空白孔(未加細胞孔)熒光強度值。各重復孔的熒光強度值取平均數。

細胞粘附率% =((F待測細胞-F空白)/(F對照細胞-F空白))×100

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