單線態氧熒光探針O21主要用于檢測液體內的單線態氧。可以用于評估自由基清除劑的功效。...

單線態氧檢測試劑盒-液體樣本

 

產品編號：HR8788

產品組成：

儲存條件：

-20℃避光保存，有效期6個月。

【注】：

● 避免反復凍融，可以根據使用量分裝后保存。

單線態氧檢測試劑盒-液體樣本簡介：

單線態氧檢測試劑盒是利用單線態氧特異性熒光探針O21單線態氧探針檢測單線態氧的試劑盒。單線態氧探針O21是合成的苯蒽類熒光探針，對單線態氧有高度的特異性，對其他活性氧物質，包括羥基自由基（HO?），超氧化物（?O2-）和一氧化氮（NO）等沒有明顯的反應。O21被單線態氧氧化生成綠色熒光物質，綠色熒光強度與單線態氧水平成正比，檢測綠色熒光就可以知道單線態氧的變化情況。

單線態氧熒光探針O21主要用于檢測液體內的單線態氧。可以用于評估自由基清除劑的功效。

單線態氧熒光探針O21不能自由穿過細胞膜，不能直接用于細胞單線態氧的檢測。如果需要用于細胞檢測，可以選擇其它貨號的產品，或者借助細胞破膜劑破膜后才能用于細胞的檢測，進入細胞內后，與細胞內單線態氧反應，生成綠色熒光物質，綠色熒光強度與細胞內單線態氧水平成正比，檢測綠色熒光就可以知道細胞內單線態氧的變化情況。

在激發波長488 nm，發射波長526 nm 附近，使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡、熒光分光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀等檢測綠色熒光，從而測定細胞內單線態氧水平。

產品特點：

● 使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標儀快速檢測；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 熒光分光光度計/酶標儀，激發波長500±15nm，發射波長520±20nm，或按照FITC熒光檢測條件檢測。 ● 移液器 ● 離心機 ● PBS ● HBSS(無酚紅)

注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。

● 單線態氧探針O21在光照和空氣中易被氧化，注意避光密封保存。

● 如果用于細胞檢測，對不同的細胞和組織，應選擇合適的孵育時間和濃度，以觀察單線態氧的變化，很多細胞內的單線態氧絕對水平較低，需要根據實際情況適當延長孵育時間。

● 單線態氧O21不可以一次性全部稀釋后長期保存不用，稀釋后穩定性變差，有效期縮短。

使用方法：

液體樣品單線態氧檢測：

1、取100μL待測液體樣品，將0.5μL O21探針加入待檢測液體樣品，充分混勻。

【注】：

● 終濃度為母液的100-1000倍稀釋使用，可以根據預實驗情況調整探針用量。

● 200-500倍稀釋適合大多數樣品。

● 微量液體不好添加時，可以根據待測樣品數量，將探針母液用水適當稀釋增加體積后，再加入待測液體樣品。

2、用熒光光度計或熒光酶標儀檢測樣品熒光情況。

綠色熒光強度與單線態氧水平成正比。

細胞樣品檢測：

單線態氧O21探針配制：

根據需要的用量，用無血清培養基200倍稀釋單線態氧O21探針后充分混勻，避光保存備用。

【注】：

● 終濃度為母液的100-1000倍稀釋使用，可以根據預實驗情況調整探針用量。

● 200-500倍稀釋適合大多數樣品。

細胞破膜：

1、用破膜劑處理細胞。

2、用PBS洗滌細胞2-3次。

單線態氧O21探針標記：

3、單線態氧O21溶液可在新鮮無血清培養基、HBSS緩沖鹽溶液中稀釋到所需濃度，100-200倍稀釋，以此染色液更換細胞培養液；也可直接向無血清細胞孵育液體中加入單線態氧O21探針溶液至所需濃度。

4、依據細胞單線態氧含量的不同，單線態氧O21終濃度可選擇在100-1000倍稀釋的范圍，孵育時間可選擇1-2小時，在37℃或室溫進行避光孵育。

5、孵育結束后，用PBS等新鮮溶液清洗細胞或組織。漂洗時間要短。

熒光檢測：

1、對貼壁生長細胞或活組織，可直接在熒光顯微鏡下觀察；對懸浮生長細胞，取25-50μL細胞懸液滴到一張顯微載玻片上，再蓋上一張蓋玻片。

2、用熒光光度計或熒光酶標儀或流式檢測樣品熒光情況。或者熒光顯微鏡/激光共聚焦下觀察。

單線態氧檢測試劑盒-液體樣本流式細胞儀分析：

1、對貼壁生長細胞，用胰酶消化制備成單細胞懸液；對懸浮生長細胞，直接收集細胞。用0.5～1 mL冰冷PBS重懸細胞（5～10萬）。

2、采用488nm波長激發，測定待測細胞平均熒光強度。使用488nm 激發波長，525nm發射波長，實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱。探針O21的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數設置檢測探針產物。

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