蛋白提取液采用優質原料配制，對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用，是經典常用的細胞組織快速蛋白提取液。本蛋白提取液提取得到的蛋白樣品可以用于常規的 Western Blot、IP 等下游實驗。...

蛋白提取液(Western)

 

產品編號：HR0359

產品組成：

蛋白提取液(Western)儲存條件：

蛋白提取液2-8℃保存，蛋白酶抑制劑-20℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存，開蓋使用后-20℃儲存。

產品簡介：

蛋白提取液采用優質原料配制，對動物細胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強裂解作用，是經典常用的細胞組織快速蛋白提取液。

本蛋白提取液提取得到的蛋白樣品可以用于常規的 Western Blot、IP 等下游實驗。

適用樣本：

● 細胞 ● 組織

產品特點：

● 使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

● 提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30 分鐘-1 小時。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6 種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 渦旋混勻器 ● PBS

蛋白提取液(Western)使用方法：

細胞蛋白提取

1、蛋白提取液制備：

每1ml冷的蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2、取5-10×10⁶個細胞，在4℃，1000g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞。

3、用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

4、每5×10⁶個細胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。

【注】：

● 每10⁶個細胞，大約10mg或10μL壓積，加100μL蛋白提取液。大約相當于6孔板的每孔加入100μL～150μL，或一個75cm²培養瓶加1ml。提取液和細胞應充分接觸。如果蛋白提取液不足量，細胞裂解效率將會降低。

5、在4℃，12000-14000g條件下離心15分鐘。

6、快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。

組織蛋白提取

1、蛋白提取液制備：

每1ml冷的蛋白提取液加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

2、取100mg組織樣本剪碎，加入1ml蛋白提取液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。

3、將組織勻漿在4℃振蕩15-25分鐘。

4、在4℃，12000g條件下離心10分鐘。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，用于下游實驗。

 

上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存備用。

【注】：

● 建議用BCA法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

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