植物核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白。提取過程簡單方便。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取...

植物核蛋白提取試劑盒-酶法

 

產品編號：HR8045

產品組成：

儲存條件：

蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存，有效期1年。

【注】：

● 提取液A長期不用請置-20℃保存。

● 蛋白酶抑制劑未開蓋前也可以2-8℃保存，開蓋使用后-20℃保存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

植物核蛋白提取試劑盒-酶法簡介：

植物核蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種植物細胞和各種實體植物組織，如葉片、根、種子等植物組織中提取核蛋白。提取過程簡單方便。制備的核蛋白不僅純度高，保持天然活性，而且絕少交叉污染。

本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解植物核組份。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒采用酶法提取，酶法提取制備的植物核蛋白，回收率提高，純度高，保持天然活性，但是耗時較長。非酶法的提取試劑盒提取過程簡單方便，速度快，可在1小時內完成，而且絕少交叉污染，但是回收率相比酶法較低。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒（相關產品HR0103），對提取速度沒有要求的話，可以選擇酶法提取試劑盒。請根據實際需要選擇試劑盒。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產品HR0389）。

產品特點：

● 使用方便。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑耗材和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● 100μm細胞篩

● PBS ● 蛋白定量試劑盒

植物核蛋白提取試劑盒-酶法使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

使用方法：

1、提取液制備：

每200μL提取液C中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液C為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-500mg植物葉片組織樣本用手術剪刀盡可能剪碎。

【注】：

● 也可用刀片將葉片樣本切成小塊。用鋒利的手術刀片切成0.5mm*0.5mm細塊。

3、加入1-2mL PBS后用勻漿機充分勻漿或者加適量PBS 后用勻漿器充分勻漿。

4、將勻漿液用100μm細胞篩過濾；

【注】：

● 沒有細胞篩的話，在4℃，稍微靜置，讓粗纖維，成團組織塊等沉降，或者以低于100×g力條件下離心1分鐘，收集細胞上清，棄組織沉淀。

● 有些含黏液較多的樣品可能難以吸取，可以將1mL吸頭尖稍微剪掉一點使用。

5、將濾液在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

6、在沉淀中加入500μL提取液A，充分混勻。

【注】：

● 培養細胞1000×g條件下離心5分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞后用PBS洗滌2次，然后直接加入提取液A重懸。

● 大約每300μL細胞沉淀體積中加入1mL提取液A。

● 一般加入樣本體積的2-3倍體積的提取液A，充分淹沒樣本即可。

7、將細胞懸液置振蕩器上37℃振蕩12-72小時。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，中間每隔幾小時用移液器吹打混勻即可。

● 不同類型的植物樣本需要處理的時間差異較大。擬南芥較易處理，鮮嫩葉片較易處理，年齡小的樣本處理時間短。擬南芥嫩葉最短4小時即可。

● 部分細胞壁較厚的植物類型可能需要處理更長時間。可以延長至12小時以上過夜處理以提高核蛋白得率。

8、在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

9、在沉淀中加入1mL提取液B，用勻漿器充分勻漿。

10、置振蕩器振蕩15分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，置4℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

11、在2000×g條件下離心10分鐘，棄上清，收集沉淀。

12、在沉淀中加入100-200μL冷的提取液C，充分混勻。

13、置4℃振蕩20-40分鐘。

【注】：

● 使用振蕩器/搖床的較低轉速，提取液能輕微晃動即可。

● 沒有振蕩條件也可以不振蕩，置4℃靜置，稍微延長處理時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻即可。

14、在4℃，12000×g條件下離心5分鐘。

15、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到核蛋白。

16、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA 法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

常見問題分析：

● 蛋白濃度低？

植物核蛋白豐度比較低，在條件允許的情況下，盡可能增加樣本量。

處理部分樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當增加試劑A 的勻漿次數，并適當延長試劑A 和B 的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA 法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取時出現膠狀沉淀？

蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物，屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下，可以直接離心取上清進行后續實驗即可；如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理，300w/10秒間隔10秒，超聲3分鐘，隨后離心取上清用于后續實驗。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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