本試劑盒具有高的靈敏度，良好的選擇性，短的響應時間，以及可對檢測對象在原位進行實時監控和觀察等。更重要的是，這種檢測技術對細胞內活性氮的內源性分布不產生巨大的外加干擾，從而能最大程度地得到內源性活性氮變化的真實信息。...

組織活性氮(RNS)檢測試劑盒(O52)

 

產品編號：HR8833

產品組成：

儲存條件：

勻漿液2-8℃保存； 探針-20℃避光保存。有效期6個月。

【注】：

● 染料長期不用可以-20℃保存。避免反復凍融。

● 染色液探針為DMSO溶液，冬季氣溫較低時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱融解，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短時間水浴。吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

組織活性氮(RNS)檢測試劑盒(O52)產品簡介：

活性氮（reactive nitrogen species，RNS）是指NO與包括活性氧在內的化合物相互作用,生成一系列包括ONOO?及其質子形式過氧亞硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基類化合物,這些與活性氧相對應的以NO 為中心的衍生物稱為活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮（NO）和二氧化氮（NO2）、過氧化亞硝酰陰離子（ONOO?）、亞硝酰氫（HNO）、亞硝酸根離子（NO2-）和氨等。

本試劑盒是一種利用熒光探針O52進行活性氮檢測的試劑盒。在活性氮存在的條件下，O52探針與活性氮反應生成強熒光物質O52F，O52F發出的綠色熒光強度與組織內活性氮水平成正比，檢測O52F的熒光就可以知道組織內活性氮的水平。O52F的熒光最大激發波長是490nm，最大發射波長是516nm。

在激發波長488 nm，發射波長516 nm附近，使用熒光分光光度計、熒光酶標儀檢測O52F 熒光，從而測定組織內活性氮水平。

本試劑盒具有高的靈敏度，良好的選擇性，短的響應時間，以及可對檢測對象在原位進行實時監控和觀察等。更重要的是，這種檢測技術對細胞內活性氮的內源性分布不產生巨大的外加干擾，從而能最大程度地得到內源性活性氮變化的真實信息。

一般最好使用新鮮組織樣本檢測活性氮，反映的是組織當時的活性氮狀態。凍存的組織樣本的RNS在長期凍存過程中會損失掉，有條件的話就使用新鮮樣本，不建議使用凍存的組織樣本。已經凍存的組織樣本中殘余的RNS也可以用本試劑盒檢測。

產品特點：

● 使用方便：可用熒光分光光度計、熒光酶標儀檢測；

● 背景低，靈敏度高；

● 線性范圍寬，使用方便。

檢測方法：
● 熒光分光光度計 ● 熒光酶標儀

樣本類型：

● 新鮮組織

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

● 熒光分光光度計或酶標儀 ● 離心機 ● PBS緩沖液/HBSS（無酚紅） ● 蛋白定量試劑盒

● 熒光測定專用的黑色96孔板

使用注意事項：

● 螺旋蓋微量管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體灑落。

● O52染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

● 使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。

● 盡量縮短探針標記后到測定所用的時間，以減少各種可能的誤差。

組織活性氮(RNS)檢測試劑盒(O52)使用方法：

試劑準備：

根據樣本數量，用純水將O52探針10倍稀釋，配制成探針工作液。充分混勻，備用。

【注】：

● 不可以一次性將探針全部稀釋。

● 現配現用。

● O52染色液為DMSO溶液，冬季氣溫較低時在室溫時為凝固狀態，極易粘附在管壁、吸頭壁。注意需要加熱溶解，吸頭也需要放在培養箱預熱，否者容易再次凝固在吸頭內壁產生損耗。

● 微量操作時，注意探針要有效加入稀釋液中，避免沒有加入。

● 以下步驟使用的探針為此步驟配制好的探針工作液。

樣本處理：

1、剛取得的新鮮組織樣本用PBS洗凈。

2、準確稱取50mg或100mg組織樣本，加入500μL-1 mL勻漿緩沖液A，用勻漿機/勻漿器充分勻漿。。

樣本檢測：

1、在96孔板中加入190μL勻漿上清液、10μL O52探針，用移液器吹打，使之充分混勻。

【注】：

● 不同樣本的活性氧差異較大，需要根據預實驗結果調整探針用量。一般加入2-10μL探針，染色終濃度按試劑盒中探針母液的200-1000倍稀釋，200倍稀釋適合大多數樣本。

● 如果熒光強度太強，超過了檢測儀器的量程，可以減少探針用量。保證所有樣本探針用量一致即可。

● 此步加入的是經過稀釋配制的探針工作液。

● 以酶標儀檢測為例。也可以用熒光分光光度計檢測，根據所使用儀器決定勻漿液體積和染色容器。。

2、在37℃避光孵育30分鐘。

3、置于酶標儀中，后于激發波長為488nm、發射波長530nm檢測熒光強度。

【注】：

● 或使用熒光光度計等其它熒光檢測設備。

● 必須使用熒光檢測專用的黑色96孔板。

● 如果熒光強度太強，超過了儀器的檢測范圍，可以將孵育后的勻漿上清液用純水稀釋后再檢測。一般稀釋5-50倍。保證所有樣本稀釋倍數一致即可。

蛋白定量：

1、另取50μL上清勻漿液，用PBS大約稀釋20-30倍。

2、取100μL進行蛋白定量，測定蛋白濃度（mg/mL）。

結果處理：

以熒光強度（RFU）/蛋白濃度（毫克蛋白）表示組織活性氮強度。

【注】：

● 數據與蛋白濃度的單位無關。

● 此處以蛋白濃度數據作為校正系數，對不同樣品進行均一化處理。

● 熒光強度強則活性氮（RNS）含量高。

● 可以用實驗中對照樣本的熒光強度值為基準，待測組樣本的熒光強度值占對照樣本的百分比來比較活性氮（RNS）程度差異。

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