高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細胞和實體組織，如脂肪細胞、脂肪肝細胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結締組織、胸腺組織等動物組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1 小時內完成。...

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒(脫脂過濾柱)

 

產品編號：HR8025

試劑盒組成：

儲存條件：

蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制劑-20℃保存；蛋白脫脂離心管室溫保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

● 試劑拆封后請盡快使用完！

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒(脫脂過濾柱)產品簡介：

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒適用于從各種脂肪含量高的細胞和實體組織，如脂肪細胞、脂肪肝細胞、腦、脂肪、脂肪肝臟、結締組織、胸腺組織等動物組織中提取總蛋白。提取過程簡單方便，可在1 小時內完成。

本試劑盒含有的獨特配方能夠有效溶解細胞膜組份，包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣，提取液裂解細胞的能力較溫和，需要根據實際樣本情況優化裂解時間。

本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于2D電泳，如下游實驗需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請使用其他貨號的試劑盒（相關產品HR0165）。也可以將最后樣品除鹽后再用于2D電泳，用脫鹽柱脫鹽處理（相關產品HR0389）。

本試劑盒所配蛋白脫脂肪離心管可以用來濾除蛋白質溶液中的微量液態脂滴，對蛋白質無吸附。蛋白脫脂離心管可以重復使用。

產品特點：

● 使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。

● 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

● 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。

● 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。

● 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 離心機 ● 振蕩器 ● 勻漿機/勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS(pH7.4,1×) ● 蛋白定量試劑盒

使用注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

● 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

● 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。

高脂肪樣本蛋白提取試劑盒(脫脂過濾柱)使用方法：

1、提取液制備：

每500μL蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

● 根據需要處理的樣品數量準備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加過蛋白酶抑制劑的提取液一周內未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

● 可以根據需要自己添加其它蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑。

● 蛋白樣品用于測定某些細胞內蛋白酶、磷酸酶活性等下游實驗時，注意根據實際情況調整抑制劑混合物是否加入。

● 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2、取100-200mg組織樣本剪碎，加入500μL蛋白提取液A，用組織勻漿器/勻漿機充分勻漿。

【注】：

● 如果組織樣品很細小，可以剪碎后直接加入提取液振蕩15分鐘，可以不用勻漿器。

● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。

3、將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩20-45分鐘。

【注】：

● 用振蕩器/搖床的較低轉速，保持液體稍微晃動即可。

● 沒有振蕩條件可以不振蕩，置4℃靜置即可，稍微延長時間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

4、將振蕩處理過的勻漿液在4℃，12000-16000×g條件下離心15分鐘，棄沉淀，收集上清。

【注】：

● 注意只收集中間蛋白層，避免吸到上層脂肪和下層沉淀。

● 提取液液面有大量脂肪層時，建議先移除上層脂肪層，再吸取蛋白層。

5、將上清在4℃，12000-16000×g條件下離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。

6、將上清吸入蛋白脫脂離心管內管中，套上液體收集管，在4℃，10000-16000×g條件下離心10-15分鐘。

【注】：

● 小心避免吸入沉淀和上層脂肪。

● 蛋白脫脂離心管可以重復利用，一般一個離心管可以用5-10次。

● 如果內管中液體不容易離心下來時，可以將離心力提高到16000×g離心15分鐘。

7、將液體收集管中的液體吸入另一干凈離心管，即可得到蛋白樣品。

【注】：

● 蛋白脫脂離心管內管和外管用PBS 洗滌后，用于下一個樣品。

● 蛋白脫脂離心管重復利用，一般一個柱子可以用5-10次。

● 洗滌時可以加入PBS用移液器吹打，吸掉PBS。再次加入新的PBS，在10000×g離心10分鐘即可。

● 脫脂離心管對蛋白質沒有吸附，離心后可以直接使用。

8、將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

【注】：

● 建議用BCA 法進行蛋白定量。相關產品：HR0329。

● 蛋白樣品-80℃存放一年沒有問題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細菌污染。

常見問題分析：

● 蛋白濃度低？

處理部分組織樣本時可能沒有裂解完全，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。最好在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

● 用什么方法定量蛋白？

建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性嗎？

本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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