本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的線粒體提取。最好用于新鮮樣品的線粒體提取，由于冷凍樣品的線粒體在凍存過程中可能被破壞，提取回收率可能大幅降低。本試劑盒提取的線粒體可以用于各種線粒體功能研究、蛋白提取等下游應用。...

動物線粒體提取試劑盒

 

產品編號：HR0233

產品組成：

儲存條件：

2-8℃保存，長期不用可以-20℃保存，有效期1年。

動物線粒體提取試劑盒產品簡介：

線粒體(mitochondria)是真核細胞中產生能量的重要細胞器。細胞中的能源物質—脂肪、糖、部分氨基酸在此進行最終的氧化，并通過偶聯磷酸化生成ATP，供給細胞生理活動之需。對線粒體結構與功能的研究通常是在離體的線粒體上進行的，本試劑盒用簡便快速的方法即可在40 分鐘內提取得到線粒體。

本試劑盒可用于各種動物細胞和實體軟、硬組織樣本的線粒體提取。最好用于新鮮樣品的線粒體提取，由于冷凍樣品的線粒體在凍存過程中可能被破壞，提取回收率可能大幅降低。

本試劑盒提取的線粒體可以用于各種線粒體功能研究、蛋白提取等下游應用。

適用樣本：

● 組織 ● 細胞

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 移液器 ● 離心機 ● 振蕩器 ● Dounce勻漿器 ● 渦旋混勻器 ● PBS緩沖液

注意事項：

● 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

● 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。

● 最好使用標準Dounce勻漿器勻漿，如果沒有標準Dounce勻漿器，用普通1mL玻璃勻漿器勻漿也可，但是線粒體回收率會下降。

使用方法：

細胞線粒體提取：

1、取1-2×10⁷個細胞，在4℃，500×g條件下離心2-3 分鐘，小心吸取培養基，盡可能吸干，收集細胞；

2、用冷PBS洗滌兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。

【注】：

● 用1000×g力離心5分鐘。

3、細胞沉淀中加入500μL-1mL冷的試劑A重懸，置冰上5分鐘。

4、用 Dounce勻漿器勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

6、將上清在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。

7、將上清在4℃，11000×g力條件下離心15分鐘。棄上清，收集沉淀。

8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，輕輕混勻。

9、在4℃，11000×g以上條件下離心15分鐘。

10、棄上清，沉淀用線粒體保存液重懸。

【注】：

● 也可不用試劑盒中的線粒體保存液重懸。

● 根據實驗需要選擇合適的緩沖液重懸線粒體或直接用于下游實驗。

11、即得到線粒體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

動物線粒體提取試劑盒組織線粒體提取：

1、取50-100mg新鮮動物組織樣本，用PBS洗滌干凈。

2、用手術剪刀盡可能剪碎，用冷PBS洗滌兩次。

【注】：

● 用1000×g里離心5分鐘。

3、沉淀中加入500μL-1mL冷的試劑A混勻，置冰上5分鐘。

4、用Dounce勻漿器勻漿30-40下，然后在4℃，500×g條件下離心5分鐘。

【注】：

● 先用Dounce勻漿器的松型槌初步勻漿10-20次，再用緊型槌勻漿20-30次。

● 每上下一個來回為一次。

5、將上清吸入另一預冷的干凈離心管，棄沉淀。

6、將上清在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。

7、將上清在4℃，11000×g力條件下離心15分鐘。棄上清，收集沉淀。

8、在沉淀中加入400μL冷的試劑B，輕輕混勻。

9、在4℃，11000×g以上條件下離心15分鐘。

10、棄上清，沉淀用線粒體保存液重懸。

【注】：

● 也可不用試劑盒中的線粒體保存液重懸。

● 根據實驗需要選擇合適的緩沖液重懸線粒體或直接用于下游實驗。

11、即得到線粒體樣品，置冰箱備用或直接用于下游實驗。

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