AlamarBlue的無毒特性使細菌可長期暴露于這種染料,因此可隨時間進行測量或進行終點測量。由于AlamarBlue對細菌無毒、無害,不影響細菌的合成與分泌等活性,因此可以對同一批細菌的增生狀態進行連續觀察和進一步的實驗觀察,因此有操作簡便和幾乎不干擾細菌正常代謝的特點。...

細菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue

 

產品編號：HR0506

產品組成：

儲存條件：

2-8℃避光保存。有效期1年。

【注】：

● Alamar Blue存放于2-8℃,長期不用請分裝后-20℃避光保存。

● 避免反復凍融。多次凍融會導致失效。

● 凍存后溶解時注意重新混勻。

● 試劑拆封會請盡快使用完！

細菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue產品簡介：

本試劑盒是應用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍快速高靈敏度檢測細菌活性的比色檢測產品。

AlamarBlue是一種氧化還原指示劑,能根據代謝活性產生吸光度變化和熒光信號。其在氧化狀態下呈現紫藍色無熒光性,而在還原狀態下,轉變為呈粉紅或紅色熒光的還原產物,其吸收峰為530-560nm,而散射峰為590nm。在細菌增殖過程中,體內NADPH/NADP、FADH/FAD、 FMNH/FMN 和NADH/NAD 的比值升高,處于還原環境。攝入菌體內的染料被這些代謝中間體還原后釋放到體外并溶于培養基中,使培養基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。最后用普通分光光度計或熒光光度計進行檢測,吸光度和熒光強度與活性細菌數成正比。這種染料經過驗證安全無毒,用于細菌活性和細菌增殖的定量分析。

AlamarBlue的無毒特性使細菌可長期暴露于這種染料,因此可隨時間進行測量或進行終點測量。由于AlamarBlue對細菌無毒、無害,不影響細菌的合成與分泌等活性,因此可以對同一批細菌的增生狀態進行連續觀察和進一步的實驗觀察,因此有操作簡便和幾乎不干擾細菌正常代謝的特點。

檢測方法：

● 在530-560nm激發,在590nm發射熒光

● 在570nm和600nm用分光光度計測定光吸收

產品特點：

● 使用方便：僅使用單一試劑；

● 對微生物細胞進行靈敏、無毒且安全的細胞活力和增殖測定；

● 能長期使用,持續進行測定而不損傷細菌或產生有毒廢物；

● 靈活、簡便- 能與多種儀器平臺、96和384孔板以及熒光或分光光度法測定兼容；

試劑盒以外自備試劑和儀器：

● 酶標儀或分光光度計 ● 離心機 ● 移液器 ● 純水 ● PBS/HBSS(無酚紅) ● 96孔培養板

使用注意事項：

● 合適密度的細菌可以增加檢測靈敏度。

● 注意接種細菌濃度和加入檢測試劑后孵育時間。細菌濃度過高或孵育時間過長,會導致繼發性還原反應,產生無色和熒光消失。

● 孵育時,需避光。

● 本產品可以使用熒光或分光光度檢測,但熒光的靈敏度高,實驗誤差小,推薦使用熒光檢測。

● 需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

● 正式實驗前,建議先做預實驗摸索接種細菌的數量和加入Alamar Blue試劑后的培養時間。

細菌活性檢測試劑盒-AlamarBlue使用方法：

細菌的活性實驗,一般可在96孔細胞培養板中進行,下面以96孔板檢測為例,如果使用其他培養方法,AlamarBlue試劑加入培養液用量的10%即可。

1、每孔加入100μL細胞懸液。細胞的數量取決于實驗目的和培養時間。具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等因素確定。

2、接種的細胞按照實驗需要,送入培養箱進行培養。

3、培養結束后,取出AlamarBlue試劑,置室溫融化混勻,于潔凈工作臺內按10μl/孔加入微孔板中,在培養箱內繼續孵育12-24小時,培養液顏色由藍變為粉紅（如采用熒光分光光度法,只需孵育2-8小時）；

【注】：

● 檢測靈敏度隨著溫育時間的延長而增加，細胞數量少的樣品應延長孵育時間至24h。細胞濃度過高或孵育時間過長，會導致繼發性還原反應，產生無色和熒光消失。溫育時間要摸索。

4、在570nm測定吸光度,參考波長600nm。如無此濾光片,可用565nm和 610nm的濾光片替代。

【注】：

● 數據處理時用A570減去A600.

5、也可用熒光分光光度法檢測,激發光波長560nm（在530-560nm之間均可）,發射光波長為590nm。

【注】：

● 熒光檢測更為靈敏，無法檢測熒光時測定吸光度。

● 測定板或試管可用鋁箔紙包裹，并保存在4℃，然后在1-3天之內檢測而不會影響熒光或吸光度值。

● （可選）可以直接添加反應終止液到100μL的細胞中可終止細胞活力試劑反應。

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