CCK8細胞增殖與毒性檢測試劑是高品質的工具酶產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于工具酶產品的研發、生產和供應，為您提供的CCK8細胞增殖與毒性檢測試劑質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括CCK8細胞增殖與毒性檢測試劑在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：CCK8細胞增殖與毒性檢測試劑
英文名稱：CCK8 cell proliferation and toxicity test reagents
產品貨號：MT0102
產品規格：100次(1ml)|500次(1ml×5)

本制品是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性檢測的試劑，因其操作簡單快速、高靈敏度且細胞毒性低等成為替代MTT法檢測細胞生長密度的zuì好方法。該試劑盒利用水溶性四唑鹽-WST-8在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量與活細胞數量成正比。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。本制品廣泛應用于細胞增殖測定、細胞毒性測定、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗等。

產品特點：
·靈敏度高，數據重復性好；
·操作簡單，安全性高；
·細胞毒性低，無需放射性同位素；
·單一組分，無需配制。

應用實例：

接種96孔板293T細胞，每孔加入10μl CCK-8溶液，混合均勻，在37℃，5% CO2培養箱中培養，酶標儀讀取不同培養時間的OD值，做標準曲線。

操作方法：

一、細胞計數測定
1．96孔培養板中貼壁或懸浮細胞100μl/孔培養體積(>2000個細胞/孔)。
2．向每孔加入10μl的CCK- 8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數)。如果起始的培養體積為200μl，則需加入20μl CCK-8溶液。
  注意：加了相應量細胞培養液和CCK-8溶液，但沒有加入細胞的孔作為空白對照。
3．將培養板在培養箱內孵育1-4小時。
4．用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
5．如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μl 1% w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮蓋培養板避光保存。在24小時內吸光度不會發生變化。

二、細胞增殖實驗和細胞毒性檢測
1．96孔培養板中貼壁或懸浮細胞100μl/孔培養體積(＞5000個細胞/孔)。
2．向培養板加入10μl不同濃度的待測藥物。
3．將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如:6,12,24或48小時)。
4．向每孔加入10μl CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響O.D值的讀數)。
5．將培養板在培養箱內孵育1～4小時。
6．用酶標儀測定在450nm處的吸光度。
7．如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μl 1%w/v SDS溶液或者0.1M HCl溶液，并遮蓋培養板避光保存。在24小時內吸光度不會發生變化。

三、制作標準曲線（需要測定細胞數量時)
1．先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。
2．按比例(例如1:2的比例)依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3～5個細胞濃度梯度，每組3～6個復孔。
3．接種后培養使細胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養一定時間后測定O.D值，制作出一條以細胞數量為X軸，O.D值為Y軸的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致)。

注意事項：
1．接種時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數量不等，可以每接種幾個孔就混勻一下。培養板周圍一圈孔培養基容易揮發，為了減少誤差，建議培養板的四邊每孔只加培養基或PBS，而不作為指標檢測孔。
2．本制品的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會干擾檢測，需設法去除。
3．用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。
4．培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異。一般情況下，白細胞較難染色，因此需要較長的培養時間或增加細胞數量（~10⁵個細胞/孔)。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難染色。對于懸浮細胞，在培養1～4小時后，可先從培養箱中取出，目察染色程度或用酶標儀測定決定。若染色困難，可將培養板放回培養箱，繼續培養數小時后再確定。 染色的zuì佳時間可定為懸浮細胞的zuì佳培養時間。對于貼壁細胞，培養時間一般為1～4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度（根據細胞種類而定，需要摸索一下條件)。
5．若細胞培養時間較長，培養基顏色發生變化或pH發生變化，建議更換新鮮的培養基后再加CCK-8試劑。

保存條件：-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反復凍融會增加背景值。

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名稱：DNase I溶液
貨號：BTN130984
規格：1.5mL
本產品是DNase I的10mg/mL的溶液，酶活性為1500-2500U/mg。DNase I從牛胰腺純化得到是一種可以消化單鏈或雙鏈DNA產生單脫氧核苷酸或單鏈或雙鏈的寡脫氧核苷酸的核酸內切酶，分子量約32kDa(單體)。DNase I水解單鏈或雙鏈DNA后的產物，5′端為磷酸基團，3′端為羥基。其活性依賴于鈣離子，并能被鎂離子或二價錳離子激活。鎂離子存在條件下，DNase I可隨機剪切雙鏈DNA的任意位點；二價錳離子存在條件下，DNase I可在同一位點剪切DNA雙鏈，形成平末端，或1-2個核苷酸突出的粘末端。

產品特點：
1．即開即用，不需要用戶單獨配置。
2．可用于制備RNase-free的DNase。本產品為粗制品，可能含殘留的RNase，不能直接用于清除RNA樣品中的DNA。
3．本產品可直接用于DNase I Footprinting實驗、缺口平移(Nick Translation)、制備DNA隨機片斷文庫、制備TUNEL檢測中的陽性對照。

儲存條件：低溫運輸、-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
本產品可用于DNase I Footprinting實驗、缺口平移(Nick Translation)、制備DNA隨機片斷文庫、TUNEL檢測中剪切基因組DNA作為陽性對照。具體使用方法請參考相關資料。

注意：本產品濃度較高，如需對其進行稀釋，需要自備DNase I儲存液。

DNase I儲存液的配方：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl?，50%(v/v)甘油。

附錄：
1．DNase I活性定義：37℃10分鐘內，將能夠完全降解1μg pBR322質粒DNA所需的酶量定義為1個活性單位。
2．DNase I活性檢測條件：40mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgSO4，1mM CaCl2，1μg of pBR322 DNA。
3．純度：不含其它DNA內切酶和外切酶。
4．DNase I酶儲存溶液：50mM Tris-acetate(pH7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v)甘油。
5．DNase I酶反應液(10×)：100mM Tris-HCl(pH7.5 at 25℃)，25mM MgCl2，1mM CaCl2。
6．失活或抑制：加入EDTA至終濃度為2.5mM后，65℃加熱10分鐘可使DNase I失活。酚氯fǎng抽提也可以使DNase I失活。金屬離子螯合劑，達到毫摩爾/升濃度的鋅離子、0.1%的SDS、DTT、巰基乙醇等還原劑，50-100mM以上鹽濃度均對DNase I有顯著抑制作用。

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