SYA011 蠟樣芽孢桿菌單重熒光PCR檢測試

產品簡介
蠟樣芽孢桿菌單重熒光PCR檢測試是高品質的細菌PCR檢測試劑盒產品,由北京百奧萊博供應,本產品用于科研試驗,我公司專注于細菌PCR檢測試劑盒產品的研發、生產和供應,為您提供的蠟樣芽孢桿菌單重熒光PCR檢測試質量可靠,批間差小,且價格公道,熱切盼望您選購我們的產品。...
產品詳細介紹
特別提示:包括蠟樣芽孢桿菌單重熒光PCR檢測試劑盒在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱:蠟樣芽孢桿菌單重熒光PCR檢測試劑盒
英文名稱:Fluorescent PCR detection kit for Bacillus cereus
產品貨號:SYA011
產品規格:48次/盒
一、簡介:
本試劑盒用一對蠟樣芽胞桿菌特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR技術對蠟樣芽胞桿菌的核酸進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。
二、用途:
本試劑盒適用于檢測水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的蠟樣芽胞桿菌(BC),用于蠟樣芽胞桿菌(BC)感染的輔助診斷,其檢測結果僅供參考。
三、試劑盒組成:(48T)
組份 數量 規格
BC反應液(BC-qPCR MIX) 1管 672μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
BC陽性對照(BC-PTC) 1管 50μL/管
四、儲存條件及有效期:
本試劑盒于-20℃以下保存,有效期為12個月。
五、熒光PCR儀器適用范圍:
ABI系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。
六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
水樣便取0.5-1mL;疑似污染的食物取1g。
6.2 樣品前處理
水樣便13000 rpm離心 2min,去盡上清;疑似污染的食物用手術剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至 1.5mL滅菌離心管中,8000rpm 離心 2min,取上清液 100μL于1.5mL滅菌離心管中;疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業化產品,并按照相應試劑盒說明進行操作。
對上述處理好的樣本加入等體積核酸提取液(固體標本加入50μL核酸提取液),100℃恒溫處理10min,13000rpm離心5min,取上清液轉移至新的1.5mL EP管,-20℃保存;
注:陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。
七、檢測步驟
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
八、結果分析
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1) 陰性對照(NTC):不應產生任何的擴增曲線。
(2) 陽性對照(BC-PTC):均產生擴增曲線。
(3) 以上條件應同時滿足,否則,此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
(2) 在試驗成立的條件下,Ct值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線,表明BC核酸陽性。
(3) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明BC核酸陰性。
(4) 如果Ct值>35,判為可疑樣品。對于可疑樣品,先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(5) 對于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進行BC 檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線,判為樣本陽性,表明BC核酸陽性;否則判為樣本陰性。
九、注意事項:
(1) 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR擴增區等),防止實驗室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
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名稱:沙門氏菌單重熒光PCR檢測試劑盒
貨號:SYA002
規格:48次/盒
一、簡介
沙門氏菌(Salmonella)可引發人類、家畜以及野生禽獸不同形式的疾病。感染沙門氏菌的人或帶菌者的糞便污染食品,可使人發生食物中毒。據統計在各國的種類細菌性食物中毒中,沙門氏菌引起的食物中毒常列榜。本方法為熒光PCR檢測方法,反應在同一管內連續進行,操作簡單,并有效防止了污染,能對樣品中或預培養液中的沙門氏菌進行快速檢測,具有特異性高、敏感性強和操作簡便的特點。沙門氏菌的探針報告基團為FAM,淬滅基團為None。
二、用途
該試劑盒適合于增菌培養物、疑似病料及食品中沙門氏菌的檢測。
三、試劑盒組成(50T/Kit)
組份 數量 規格
沙門氏菌熒光qPCR反應液(Sal-qPCR MIX) 1管 750μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對照(Sal-PTC) 1管 50μL/管
四、熒光PCR儀器適用范圍
ABI系列,Bio-Rad系列,Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。
五、儲存條件及有效期:
本試劑盒于-18℃以下保存,有效期為6個月。
六、樣品采集與DNA提取
6.1 樣品采集
6.1.1 食品樣品:樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照《食品安家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗》(GB 4789.4-2010)要求進行。
6.1.2 糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
6.1.3 病灶部位樣品:取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
注:上述樣品建議經過增菌后,收集培養物用于檢測。
6.2 DNA提取(用戶可根據需要選擇商業化DNA提取試劑盒)
6.2.1 培養物:取培養物50μL(培養至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min,取上清5μL進行PCR反應。
6.2.2 糞便樣品:挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中,加入0.5mL生理鹽水,振蕩混勻,13000rpm離心3分鐘,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
6.2.3 其他液體標本:取標本2-3mL,13000rpm離心3min,棄上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻,100℃恒溫10min,13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
注:陽性對照和陰性對照為已經抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議zuì后在樣品制備區域加入陽性對照。
七、檢測步驟:
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qPCR反應液(Sal-qPCR MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 15μL N×15μL
向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(Sal-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內。
推薦循環條件:
1循環 50℃ for 2 min
預變性 1循環 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。
八、結果分析
8.1 結果分析條件設定
直接讀取檢測結果。基線和閾值設定原則根據儀器噪聲情況進行調整,以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1) 陰性對照(NTC):不應產生任何的擴增曲線。
(2) 陽性對照(Sal-PTC):均產生擴增曲線。
(3) 以上條件應同時滿足,否則,此次試驗視為無效。
8.3 結果判定
(1) 在試驗成立的條件下,Ct值≤35的樣本為陽性,表明Sal核酸陽性。
(2) Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本,表明Sal核酸陰性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判為可疑樣品。對于可疑樣品,先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數擴增曲線,則為可疑陽性,否則判為陰性。
(4) 對于可疑陽性樣品,重新抽提核酸,再次進行Sal qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數擴增曲線,判為樣本陽性,表明Sal核酸陽性;否則判為樣本陰性。
九、注意事項:
(1) 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2) 所有使用的離心管應高壓滅菌,而且必須不含DNA酶。
(3) PCR操作應嚴格按照要求分區(試劑配制區、標本處理區、PCR擴增區等),防止實驗室污染。
(4) 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區的超凈工作臺進行,以免污染。
(5) 試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

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