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特別提示：包括BJ5183-AD-1電擊感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：BJ5183-AD-1電擊感受態細胞
英文名稱：BJ5183-AD-1 Electroporation-Competent Cell
產品貨號：MQ0029
產品規格：5×50μl/20×50μl

BJ5183-AD-1是攜帶了腺病毒質粒pAdeasy-1的BJ5183菌株。
BJ5183菌株是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株，是目前腺病毒系統zuì常用的感受態細胞。
BJ5183菌株含有sbcBC recBC雙重突變，賦予BJ5183細胞較強的重組能力，有利于轉入的目的基因與腺病毒骨架質粒的重組。endA1(缺失核酸內切酶)的突變有利于重組DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株細胞中已經提前轉入了腺病毒質粒pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome(E1/E3 deleted)]，賦予該菌株氨芐抗性，在病毒質粒構建時，只需轉入線性化的目的質粒即可，簡化了實驗步驟，提高了病毒質粒重組概率。
Strr賦予BJ5183-AD-1菌株鏈霉素抗性。
BJ5183-AD-1電擊感受態細胞適用于普通質粒和大質粒的構建，經特殊工藝制作，pCAMBIA2301質粒(size:1163bp)檢測轉化效率>1×106 cfu/μg DNA。
保存條件：-80℃
基因型：
endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR(Strr)[pAdEasy-1(Ampr)]
操作說明：
1.0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發，待乙醇揮發干凈立即插入冰中，壓實冰面，電杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的BJ5183-AD-1電擊感受態細胞插入冰中5分鐘，待其融化，加入目的DNA(質粒或連接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻，避免產生氣泡，立即插入冰中。
A.測定轉化效率使用1 μl 10 pg/μl的對照質粒pCAMBIA2301；
B.對于連接產物，請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重懸，DNA濃度不超過100 ng/μl，體積不超過5 μl/50 μl感受態。
3.用200 μl槍頭(用刀切除0.5cm槍尖)將感受態-DNA混合物快速移到電擊杯中，避免產生氣泡，蓋上杯蓋。
4.啟動電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV(此為BioRad電轉儀推薦參數，也可按所用電轉儀推薦的參數操作)，將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中。
5.2分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入700μl不含抗生素的無菌S.O.C.培養基(室溫)，用1ml槍吹吸電擊杯底部數次混勻后，轉移到50ml離心管(BD Falcon 50 ml錐形離心管等)，向離心管中補加S.O.C.培養基至10ml。37℃，225 rpm復蘇60分鐘。
6.5000 rpm離心一分鐘收菌，重懸后取100-200 μl涂布到含相應抗生素的S.O.C平板上(因菌量較大，若全部涂板請選用直徑15cm培養皿2-5個)。將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。
注意事項：
1.加入DNA時體積不應大于感受態體積的1/10。
2.電擊感受態細胞加入電擊杯應避免產生氣泡，氣泡會增加弧光放電風險。
3.當DNA不純或存在鹽，乙醇，蛋白及緩沖液等污染時，轉化效率急劇下降。
4.電擊杯里的離子可增加溶液的電導，增大在含有細胞和DNA的溶液中產生電流和弧光放電的風險。
5.若轉化大質粒或想獲得較高轉化效率，推薦使用高純質粒提取試劑盒提取質粒。質粒增大一倍，轉化效率下降一個數量級。
6.對于連接產物轉化，zuì好轉化前乙醇沉淀DNA后用適量TE緩沖液(10 mM Tris HCl，pH7.5;1 mM EDTA)重懸產物，保證 DNA濃度不超過100ng/μl。過高濃度連接產物或過大體積連接產物會降低轉化效率，增加弧光放電的風險。
7.混入質粒時應輕柔操作，吸取感受態細胞時避免用力過猛，以免剪切力過大損傷細胞膜，降低轉化效率。轉化高濃度的質粒或連接產物可相應減少zuì終用于涂板的菌量。
8.電擊感受態細胞zuì好保存在-80℃以下，高于-80℃超期儲存會導致轉化效率會下降。

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貨號	名稱	規格
BTN160101	pression/BTN160101.html" target="_blank">pUCm-T載體	1μg
BTN51104	pression/BTN51104.html" target="_blank">B載體	2μg
BTN90407B	pression/BTN90407B.html" target="_blank">λDNA(不含N6-甲基腺嘌呤)	5μg
BTN120680	pression/BTN120680.html" target="_blank">放線菌素D	1mL
BTN120686	pression/BTN120686.html" target="_blank">細胞松弛素B溶液	0.1mL
YT004	pression/YT004.html" target="_blank">酵母質粒小量抽提試劑盒	50次
YT468	pression/YT468.html" target="_blank">C端YFP標簽融合蛋白質粒(黃色熒光蛋白)	1μg

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名稱：即用型藍白T載體E型(無RNA啟動子，無MCS)
貨號：BTN120515
規格：20次
本產品是用Xcm I酶切線性化的DNA片段，其兩個末端的5′都有一個突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐熱酶(如Taq DNA聚合酶)擴增得到的PCR片段。

產品特點：
1. 由于是通過酶切制備，所以載體兩端的帶T率為，遠高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端轉移酶在平末端載體加尾得到的T載體。
2. 克隆的陽性率一般在90%以上，縮短了篩選過程。
3. 來源于pUC19 ，無RNA聚合酶啟動子，插入位點兩側無多克隆位點。
4.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse測序引物測定插入片段的序列。
5. T克隆位點位于β-半乳糖苷酶的α 肽編碼區內，可以進行藍白斑篩選。
6.含有絲狀噬菌體f1 復制起始子，可以制備單鏈DNA。

產品組成：

組分	規格
即用型藍白T載體E型(10ng/μL)	60μl
陽性對照(35ng/μl)	30μl

儲存條件：低溫運輸，-20℃保存，有效期兩年。

質粒圖譜


名稱：大腸桿菌DB3.1化學感受態細胞
貨號：BTN140218
規格：10*100μl
本產品是采用大腸桿菌DB3.1細胞含有gyrA462基因，對λ噬菌體的ccdB基因產物的毒性具有抵抗作用，特別適合用于轉化和擴增包含ccdB基因的質粒載體。

產品特點：
1. 使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達107，-80℃保存幾個月轉化效率不發生改變。
2. DB3.1感受態細胞具有鏈霉素抗性。
3. DB3.1菌株基因型：F- gyrA 462endA1 Δ(sr1-recA)mcrB mrr hsdS20(rB-,mB-)supE44Ara-14 galK2 lac Y1 proA2 rpsL20(SmR)xy1-5 λ- leu mtl1
4. 本產品質量穩定，使用方便，質優價廉。

儲存條件：干冰運輸、-80℃保存，有效期半年。
自備試劑：目的DNA、SOC或LB培養基等

使用方法：
1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。
以下實驗以100μL感受態細胞為例。
2. 待感受態細胞融化后，向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA，通常100μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA 所飽和)，用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3. 42℃熱擊90秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。
4. 每個離心管中加入450μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)，混勻后置于37℃搖床，150rpm 振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
5. 根據實驗需求，取適量已轉化的感受態細胞，加到含有相應抗生素的LB 固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養12-16小時。

注意事項：
1、涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA 總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；若轉化的DNA 總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少，可通過離心(4,000rpm ，2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。
2、新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。

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