副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素的品牌是百奧萊博，是優(yōu)質(zhì)的細菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品，本制品僅用于生物化學研究方面，我公司專注于細菌PCR檢測試劑盒產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和供應，為您提供的副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素質(zhì)量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產(chǎn)品。...

特別提示：包括副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素(TLH)單重熒光PCR檢測試劑盒在內(nèi)，本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

產(chǎn)品名稱：副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素(TLH)單重熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號：SYA070
產(chǎn)品規(guī)格：48次/盒

一、簡介：
本試劑盒用一對副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光PCR技術(shù)對副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

二、用途：
該試劑盒適用于檢測水樣糞便、疑似污染的水、食物等樣本中的副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素(TLH)，用于副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素(TLH)感染的輔助診斷，其檢測結(jié)果僅供臨床參考。

三、試劑盒組成：(48T)

組份	數(shù)量	規(guī)格
TLH反應液(TLH-qPCR MIX)	1管	672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction)	2管	1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX)	1管	48μL/管
陰性對照(NTC)	1管	50μL/管
TLH陽性對照(TLH -PTC)	1管	50μL/管

四、熒光PCR 儀器適用范圍
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他熒光定量PCR 檢測儀。

五、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-20℃以下保存，有效期為6個月。

六、樣品采集、前處理與DNA 提取
6.1 樣品采集
水樣便取0.5-1 mL；疑似污染的食物取1g。
6.2 樣本前處理：
水樣便13000rpm離心2min，去盡上清；疑似污染的食物用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.05g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；疑似污染的水直接取100μL。
6.3 DNA提取
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的(DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)，并按照相應試劑盒說明進行操作。
對上述處理好的樣本加入50uL核酸提取液，100℃恒溫處理10min，13000rpm離心5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。
由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR 反應液(TLH-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm 離心10s。
設所需要的PCR 反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：

試劑	每個反應加入的量	N個反應加入的量
熒光PCR反應液	14μL	N×14μL
酶混合液	1μL	N×1μL
總量	15μL	N×15μL

計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm 離心10s，向設定的N 個PCR 反應管中分別加入15μL 熒光PCR 反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(TLH-PTC)5μL，10000rpm 瞬時離心10 秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內(nèi)。推薦循環(huán)條件：

	1循環(huán)	50℃ for 2 min
預變性	1循環(huán)	95℃ for 10 min
PCR擴增	40循環(huán)	95℃ for 15 sec 60℃ for 60 sec

在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
(1)陰性對照(NTC)：不應產(chǎn)生任何的擴增曲線。
(2)陽性對照(TLH-PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
(3)以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
(1)在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素核酸陽性。
(2)Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素核酸陰性。
(3)如果Ct值>35，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
(4)對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明副溶血性弧菌不耐熱溶血毒素核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
(1)初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
(2)所有使用的離心管應高壓滅菌，而且必須不含DNA 酶。
(3)PCR 操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR 擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
(4)樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
(5)試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

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貨號	名稱	規(guī)格
SYA005	金黃色葡萄球菌單重熒光PCR檢測試劑盒(定性/定量)	48次/盒
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名稱：志賀氏菌單重熒光PCR檢測試劑盒
貨號：SYA003
規(guī)格：48次/盒
一、簡介：
志賀氏菌屬(Shigella)是一類革蘭氏陰性桿菌，是人類細菌性痢疾zuì為常見的病原菌，通稱痢疾桿菌。人類及其它動物對志賀氏菌易感，10-200個細菌即可致病。本方法為熒光PCR檢測方法，反應在同一管內(nèi)進行，操作簡單，并有效防止了污染，能對樣品中或預培養(yǎng)液中的志賀氏菌進行快速檢測，具有特異性高、敏感性強和操作簡便的特點。志賀氏菌的探針報告基團為FAM，淬滅基團為None。

二、用途：
該試劑盒適合于增菌培養(yǎng)物、疑似病料及食品中志賀氏菌的檢測。

三、試劑盒組成：(50T/Kit)
組份 數(shù)量 規(guī)格
志賀氏菌熒光qPCR反應液(Shig-qPCR MIX) 1管 750μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
陰性對照(NTC) 1管 50μL/管
陽性對照(Shig-PTC) 1管 50μL/管

四、儲存條件及有效期：
本試劑盒于-18℃以下保存，有效期為6個月。

五、熒光PCR儀器適用范圍：
ABI系列，Roche系列等熒光定量PCR檢測儀等。

六、樣品的采集與DNA提取
6.1 樣品的采集
6.1.1 食品樣品：樣品采集與預培養(yǎng)參照《中華人民共和國標準 食品安家標準食品微生物學檢驗志賀氏菌檢驗(GB 4789.5-2012)》要求進行。
6.1.2 糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
6.1.3 病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
 注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。
6.2 DNA提取(用戶可根據(jù)需要選擇商業(yè)化DNA提取試劑盒)
6.2.1 培養(yǎng)物：取培養(yǎng)物50μL(培養(yǎng)至一定濁度)或者挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
6.2.2 糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
6.2.3 其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μl DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
 注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議zuì后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

七、檢測步驟：
7.1 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光qPCR反應液(Shig-qPCR MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 15μL N×15μL
向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品/陰性對照(NTC)/陽性對照(Shig-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入實時熒光PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。

八、結(jié)果分析：
8.1 結(jié)果分析條件設定
直接讀取檢測結(jié)果。基線和閾值設定原則根據(jù)儀器噪聲情況進行調(diào)整，以閾值線剛好超過正常陰性樣品擴增曲線的zuì高點為準。
8.2 試驗成立判定
（1） 陰性對照(NTC)：不應產(chǎn)生任何的擴增曲線。
（2） 陽性對照(Shig-PTC)：均產(chǎn)生擴增曲線。
（3） 以上條件應同時滿足，否則，此次試驗視為無效。
8.3 結(jié)果判定
（1） 在試驗成立的條件下，Ct值≤35的樣本為陽性，表明Shig核酸陽性。
（2） Ct值顯示為無的樣本為陰性樣本，表明Shig核酸陰性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判為可疑樣品。對于可疑樣品，先看擴增曲線。如果擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，則為可疑陽性，否則判為陰性。
（4） 對于可疑陽性樣品，重新抽提核酸，再次進行Shig qPCR檢測。如果重復擴增曲線為對數(shù)擴增曲線，判為樣本陽性，表明Shig核酸陽性；否則判為樣本陰性。

九、注意事項：
（1） 初次使用前請仔細閱讀說明書。并嚴格按照說明書步驟操作。
（2） 所有使用的離心管zuì好高壓滅菌，而且必須不含DNA酶。
（3） PCR操作應嚴格按照要求分區(qū)(試劑配制區(qū)、標本處理區(qū)、PCR擴增區(qū)等)，防止實驗室污染。
（4） 樣本提取、試劑配置、加樣需在不同區(qū)的超凈工作臺進行，以免污染。
（5） 試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。


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