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產品詳情

MT0097 耐熱RecA蛋白

  • 產品/服務:MT0097 耐熱RecA蛋白
  • 型 號:MT0097
  • 品 牌:百奧萊博
  • 單 價:面議 
  • 更新日期:2023-05-25
  • 有效期至:長期有效
  • 瀏覽次數:1113
產品簡介

北京百奧萊博供應的耐熱RecA蛋白用于科研目的,耐熱RecA蛋白是我司眾多優質基因結構和功能之一,質量堪比同類進口產品,價格非常優惠,目前正熱烈促銷中,恭候您的咨詢訂購。...

產品詳細介紹

特別提示:包括耐熱RecA蛋白在內,本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!


產品名稱:耐熱RecA蛋白
英文名稱:Thermus thermophilus RecA Protein
產品貨號:MT0097
產品規格:100μg

耐熱RecA蛋白是一種分離自嗜熱棲熱菌(Thermus thermophilus)的RecA同源蛋白。在zuì適溫度65~75℃范圍內,耐熱RecA蛋白具有依賴于ssDNA的ATPase活性。由于具有高的熱穩定性,對于需要高溫反應條件的分子生物學技術,如核酸擴增和測序而言,耐熱RecA蛋白是一個較佳的選擇。本制品濃度為1μg/μl。

產品應用:
·電鏡分析DNA結構;
·D環定點突變;
·用RecA蛋白包被的探針來進行文庫篩選。

使用注意事項:
1.該蛋白分子量為36kD。
2.該蛋白保存液含50%甘油。
3.通常50μl PCR的反應體系中可加入400ng。

保存條件:-20℃可保存3年。

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名稱:C-SKI mRNA原位雜交試劑盒
貨號:ZN0165
規格:100T
基本信息:
保存條件:4℃保存一年
工作量:100張切片。
有效期:一年。
適用種屬:rat,mouse
標記方式:3’—尾段標記
試劑盒中內容:
1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml;
2.預雜交液 2ml;
3.C-SKI mRNA原位雜交試劑盒寡核苷酸探針雜交液 2ml;
4.封閉液 5ml;
5.生物素化鼠抗dì高辛 5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化過氧化物酶 5ml。
用戶自備試劑:
原位雜交專用蓋玻片;POLY-L-LYSINE;DEPC;20%甘油
緩沖液(3%檸檬酸,2×SSC,0.5×SSC,0.2×SSC,原位雜交用 PBS)
一.培養細胞和冰凍切片
準備工作:
固定液:4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%檸檬酸——100ml蒸餾水中加檸檬酸(C6H8O7?H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸餾水中加氯化鈉17.6g,檸檬酸三鈉(C6H5O7Na3?2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸餾水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸餾水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸餾水即可。
原位雜交用PBS(1000ml蒸餾水加氯化鈉30g,Na2HPO4?12H2O 6g,NaH2PO4?2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
操作程序:
注意:zuì重要的是及時固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。
1.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.細胞在多聚賴氨酸處理的蓋玻片上進行培養,條件為37℃和5%的CO2,所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3.培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7.預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時。吸取多余液體,不洗。
8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專用蓋玻片的保護膜揭開后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過夜(根據雜交情況可以調節)。
9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗
11.滴加生物素化鼠抗dì高辛:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加生物素化過氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時蘇木素復染,充分水洗。
16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。
二.石蠟切片
如果有條件的話,應盡可能地采用新鮮標本。標本離體后,及時予以固定。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。標本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊,固定1小時即可,較大的標本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感,如動物大腦,固定時間30-40分鐘,一般不要超過1小時。
1.常規脫水、浸蠟、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的處理:一般采用多聚賴氨酸或APES。
3.石蠟切片經常規脫蠟至水。30%H2O2 1份+蒸餾水10份混合,室溫5-10分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶(1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶,混勻),37℃或室溫消化3--30分鐘(視標本新舊、厚薄自行調整)。用戶可以比較不同的消化時間,例如5分鐘,10分鐘,20分鐘,30分鐘。以找到zuì佳的消化時間。原位雜交用PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。其余步驟和冰凍切片6-16步相同。
結果觀察:
C-SKI的細胞胞漿著色呈棕黃色。
注意事項:
由于特定的mRNA序列僅占總mRNA的少數,加上基因僅由四個堿基排列組合而成,因此原位雜交容易出現非特異性染色。通過不加探針和用陰性標本做對照,基本可以確定染色是否為特異性的。有明顯的非特異性染色現象時,用預雜交液對含探針的雜交液進行稀釋,一般稀釋2—10倍;并應加強探針雜交后的洗滌。如果有少量的細胞核著色屬于正常情況;如果出現大量的細胞核著色,往往和標本固定時間過長有關,應重新處理標本。

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