BL21(DE3)化學感受態細胞是高品質的克隆與表達產品，由北京百奧萊博供應，本產品僅用于生物化學研究方面，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多BL21(DE3)化學感受態細胞等克隆與表達產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括BL21(DE3)化學感受態細胞在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：BL21(DE3)化學感受態細胞
英文名稱：BL21(DE3) Competent cell
產品貨號：RFT165
產品規格：20×100μl

本公司生產的BL21(DE3)感受態細胞采用經特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化效率不發生改變。

產品特點：
1、T7 RNA聚合酶基因的表達受控于λ 噬菌體DE3 區的lacUV5啟動子，該區整合于BL21的染色體上。
2、適用于T7、T7 lac啟動子的表達系統，如pET，pEASY。
3、適用于非毒性蛋白的表達。
4、使用pUC19質粒DNA 檢測，轉化效率可達10^7 cfu/μg DNA。

注意事項：
1、感受態細胞應保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免感受態細胞的轉化效率。
2、進行轉化操作時，應根據相應溫度及無菌條件的要求進行。
3、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，將損失降到zuì低。

操作方法：(以下操作均按無菌條件的標準進行)
1、取感受態細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛融化細胞懸液分裝到無菌預冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl，可以根據實際情況分裝使用。應注意所用DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態細胞為例。
2、向感受態細胞懸液中加入目的DNA(50μl的感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和)，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30分鐘。
3、將離心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速將管轉移到冰浴中，使細胞冷卻2-3分鐘，該過程不要搖動離心管。
4、向每個離心管中加入500μl 無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素)， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養45分鐘(150轉/分鐘)，目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5、將離心管內容物混勻，吸取100μl已轉化的感受態細胞加到含相應抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養12-16小時。

注意：涂布用量可根據具體實驗來調整。如轉化的DNA總量較多，可取更少量轉化產物涂布平板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300μl轉化產物涂布平板。如果預計的克隆較少，可通過離心(4000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養板)

儲存條件：-70℃，有效期6個月。

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名稱：酵母電轉感受態細胞制備液
貨號：BTN81201
規格：20次
本酵母電感受態細胞制備試劑是一種通過化學處理釀酒酵母和裂殖酵母電感受態細胞，使之不但馬上能用于電轉化，還能長期放置后用于電轉化。

產品特點：
1. 操作簡單，單溶液制備，除酵母培養的時間外，整個操作只需要10余分鐘。
2. 制備得到的感受態細胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次轉化都要新鮮制備感受態細胞。
3. 主要用于釀酒酵母S.cerevisia和S.pombe，但能否用于其他酵母(如C.albicans、Pichia pastoris等)不詳。
4. zuì高轉化效率可達到0.2-1×106個轉化子/ug質粒DNA。
5. 得到的感受態細胞可以用各種線性或環狀酵母穿梭質粒DNA進行轉化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
6.可以用于酵母雙雜交、定點突變、基因破壞、等位突變基因修復等實驗。
7. 本試劑盒足夠處理200mL酵母菌液，制備40管酵母感受態細胞。

儲存條件：常溫運輸和保存，有效期一年。

自備試劑：
滅菌水，SD液體培養基(不含氨基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen base，2%葡萄糖)，SD固體培養基(在SD液體培養基中再加2%瓊脂)，YPD液體培養基(1% Bacto Yeast Extract，2% Bacto Peptone，2%葡萄糖)，YPD固體培養基(在YPD液體培養基中再加2%瓊脂)

使用方法：

一：電感受態細胞的制備
 說明：按本方法制備1 管酵母電感受態細胞就需要OD600達到1.0的新鮮酵母培養液5mL，用戶需根據制備的酵母感受態細胞數量決定培養細胞的體積。下面操作只是以10mL酵母為例說明。
1.培養S.pombe細胞：挑取新鮮單菌落(4℃放置不超過3周的也可以)，接種到10mL SD液體培養基中。30℃搖晃培養，搖床速度250rpm/分鐘，直到OD600達到1.0左右(相當于1×107細胞/mL)。
2.培養S.cerevisiae細胞：挑取新鮮單菌落(4℃放置不超過3周的也可以)，接種到裝在10mL YPD液體培養基中。30℃搖晃培養，搖床速度250rpm/分鐘，直到OD600達到1.0左右(相當于1×107細胞/mL)。
3. 冰上放置15分鐘。
4.室溫1600rpm離心5 min，棄上清。
5. 用冰浴的滅菌水洗滌3次。
6. 用0.2mL冰浴的本產品重懸細胞。
7. 按每管0.1mL分裝到1.5-2mL的冷凍管中，直接放入-80℃冰箱待用。
 注意：不能放在液氮中，否則將喪失電轉化能力。

二：電轉化酵母感受態細胞
1. 將裝有0.1mL感受態細胞的冷凍管從冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化凍(快速化凍的效果好于緩慢化凍)。
2. 用1mL冰浴的本產品洗滌一次。
3. 加入50μL冰浴的本產品重懸細胞。
4. 加入1-30 ng質粒DNA 并輕柔混勻。
5.轉移到預冷的、距離為0.2cm的電擊杯中。
6. 按電擊儀的手冊設置電擊參數并進行電擊處理，參考條件為：10kV/cm(對0.2 cm的電擊杯，則為2kV)，5ms(25F，200)(各廠家儀器的使用略有不同，請嚴格按電擊儀廠家提供的手冊進行操作)。
7.電擊后將細胞轉移到1mL預冷的本產品中，輕柔混勻。
8. 取0.2mL轉化細胞涂盤(S.pombe細胞需涂盤在SD 固體培養基上，S.cerevisiae細胞需涂盤在YPD固體培養基上)，30℃培養4-6天。

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