Western Blotting由專業試劑供應商北京百奧萊博提供，用于科研試驗，我公司專注于免疫檢測產品的研發、生產和供應，為您提供的Western Blotting質量可靠，批間差小，且價格公道，熱切盼望您選購我們的產品。...

特別提示：包括Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒(藍色)(小鼠IgG)在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒(藍色)(小鼠IgG)
英文名稱：DAB chromogenic reagent kit For Western Blotting
產品貨號：ZN1932
產品規格：1盒

工作原理：聚合標記法是一種酶標記方法，其敏感性比普通酶標法有明顯提高。用于 Western Blotting的免疫學檢測，更能體現其優點。不僅能大量地節約一抗，更重要的是使條帶更清晰，甚至能檢測出普通酶標法無法檢測出的微量條帶。DAB 是過氧化物酶zuì重要的顯色劑之一，反應產物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物，適合于免疫印跡的顯色反應。本產品采用特殊配方，具有操作簡單，儲存穩定，信號靈敏度高，持續時間長，背景低，結果易保存等優點。
保存條件：－20℃冷凍保存。DAB 顯色試劑應避光保存。
有效期：一年。
試劑盒的內容：
(1)封閉試劑：10 g 蛋白干粉×1 包。
(2)濃縮抗體稀釋液：20 ml×1 瓶，為10倍濃縮液。
(3)過氧化物酶標記山羊抗小鼠IgG，效價 1：200-400。
(4)DAB 顯色試劑，含
顯色劑 A：DAB×40倍濃縮液，3ml。
顯色劑 B：H2O2×40倍濃縮液，3ml。
顯色劑 C：×40倍 TBS 濃縮緩沖液(含氯化鎳)，3ml。
使用說明：
需要而未提供的試劑和器材：
1．轉印了蛋白樣品的NC 膜或PVDF 膜：通過 SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白質抗原，將 PAG 膠上的蛋白質轉印到硝酸纖維素膜(NC 膜)或PVDF 膜上。
2．稀釋緩沖液：使用中性稀釋緩沖液即 0.02 M PBS或0.02M TBS(AR0144)配制封閉液和抗體稀釋液。0.02 M PBS(pH7.2-7.6)：1000 ml 蒸餾水加 Na2HPO4 2.8 g ，NaH2PO4 0.4 g，NaCl 8.5 g。如果用的是含水磷酸鹽，應加上分子式中水的含量。0.02M TBS(pH7.2-7.6)：1000ml 蒸餾水中加 Tris 2.42g,NaCl 9g; 純乙酸或濃鹽酸調節 pH 值(7.2-7.6)。
3．洗滌緩沖液：每 1000ml 中性稀釋緩沖液中加入 0.5 ml Tween20 即可。
4．一抗：選擇適合的一抗，用抗體稀釋液稀釋相應的一抗，一般特異性抗體工作濃度為1μg/ml,具體的稀釋度取決于特異性的一抗和膜上的抗原的量。
5．搖床：膜的封閉、抗體孵育和洗滌都需平穩搖晃，需在搖床上操作。
6．相機：記錄結果。
操作程序：
1．通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白樣本和分子量標準。
2．將蛋白樣本轉移至硝酸纖維素膜或PVDF 膜上。
3．封閉硝酸纖維膜：用封閉蛋白干粉 2 g,加稀釋緩沖液 100 ml，20-37℃封閉 1-2 小時。用量以浸沒整張膜為準。
4．用洗滌緩沖液洗滌硝酸纖維素膜 5分鐘,1次。
5．配制抗體稀釋液：取 90 ml 稀釋緩沖液加 1 g 封閉蛋白干粉和 10 ml濃縮抗體稀釋液即可。一抗、二抗均用此稀釋液稀釋。
6．硝酸纖維膜孵育一抗：用抗體稀釋液稀釋相應的一抗，一般特異性抗體濃度 1μg/ml,20-37℃孵育2 小時左右。如果缺乏特異性的條帶或陽性不強，應提高一抗的濃度；如果有非特異性的條帶，應提高一抗的稀釋度。
7．用洗滌緩沖液振蕩洗滌硝酸纖維素膜 3次,每次 5分鐘。
8．硝酸纖維膜孵育二抗：用抗體稀釋液稀釋相應的酶標二抗，效價 1：200-400。37℃孵育一個半小時左右。用戶可根據實際染色情況對稀釋度做適當調整。
9．用洗滌緩沖液振蕩洗滌硝酸纖維膜 4次,每次 5分鐘。
10．DAB 顯色:使用 DAB 顯色試劑。按每 2 ml 蒸餾水加顯色劑 A，B，C 各１滴，混勻。混勻后加至膜上。室溫顯色。一般顯色 1－30分鐘。
若無背景出現則可繼續顯色。顯色后用蒸餾水洗滌以終止反應。
11．觀察，照相。
注意事項：
1．試劑頻繁使用時置４℃，不常使用時置－20℃。顯色劑 A 需置－20℃冷凍保存。如有結晶析出，應確保結晶完全溶解再行使用。
2．顯色工作液應新鮮配制。

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名稱：BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒
貨號：YT078
規格：共100ml
本試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western等膜顯色和誘導多功能干細胞iPS鑒定等的試劑盒。

堿性磷酸酯酶常被稱作堿性磷酸酶(EC 3.1.3.1)，是一類水解酶，通過水解磷酸單酯將底物分子上的磷酸基團除去，并生成磷酸根離子和自由的羥基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白質和生物堿等，并在堿性條件下zuì為有效。該酶是一組同功酶的統稱。常見的小牛腸堿性磷酸酶被廣泛用于二抗等的標記zuì終用于蛋白和核酸等的檢測，也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸化(去單磷酸化)，特別是質粒的5’末端去磷酸化以避免質粒自連等。

BCIP/NBT是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下，BCIP會被水解產生強反應性的產物，該產物會和NBT發生反應，形成不溶性的深藍色至藍紫色的NBT-formazan。

本試劑盒可以用于細胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導多功能干細胞iPS的鑒定，也可以用于Western等結合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細胞或組織內源性的堿性磷酸酯酶顯色。

試劑盒組份：
堿性磷酸酯酶顯色緩沖液————100ml
BCIP溶液(300X)————————350μl
NBT溶液(150X) ————————700μl

儲存條件：4℃，有效期一年。

名稱：Cy3抗兔免疫熒光染色試劑盒
貨號：YT107
規格：>300次
本試劑盒含有Cy3標記的山羊抗兔IgG(H+L)抗體，可以用于檢測兔來源的相應一抗，觀察到的顏色為非常鮮艷的紅色。Cy3是近年新開發的一種紅色熒光探針。它比大部分其它的紅色熒光探針更加明亮，更加不容易淬滅，而且背景更低。Cy3的吸收峰550nm、發射峰570nm。本試劑盒提供了含有熒光標記抗體穩定劑的免疫熒光染色二抗稀釋液，可以確保熒光標記抗體稀釋后在4℃可以保存長達6個月，并且在6個月內至少可以重復使用10次。本試劑盒含有抗熒光淬滅封片液，可以使熒光更加持久。本試劑盒對于六孔板內的細胞樣品或常規切片，至少可以檢測300個樣品。

試劑盒組份：
抗兔Cy3————————————30μl
免疫熒光染色二抗稀釋液—————50ml
抗熒光淬滅封片液————————15ml

注意事項：
1. 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
2. 在使用抗熒光淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光，特別是需要盡量縮短在熒光顯微鏡下的觀察時間。
3. 熒光物質均易發生淬滅，染色后宜盡快進行熒光顯微鏡下的觀察。如果不能及時觀察可以4℃避光保存，但存放時間通常不宜超過一周，隨著存放時間的延長可能會導致觀察效果越來越差。
4. 免疫熒光染色效果的好壞和一抗的關系非常密切。建議選購有較多文獻報道的并注明可以用于免疫熒光染色的一抗用于本實驗。
5. 如果觀察時發現熒光過弱，可以適當提高一抗的濃度；如果熒光還是比較弱，可以適當提高熒光標記抗體的濃度。

儲存條件：-20℃，有效期一年。


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