北京百奧萊博供應的高純質粒少量提取試劑盒用于科學研究，我公司的高純質粒少量提取試劑盒品質上佳，經過多年的開發生產，已然非常成熟，歡迎廣大新老客戶訂購。...

特別提示：包括高純質粒少量提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：高純質粒少量提取試劑盒
英文名稱：High Purity Plasmid mini Extraction Kit
產品貨號：WH0035
產品規格：50次

本試劑盒在離心柱型質粒提取試劑盒基礎上，增加了本公司特制的過濾柱CS，可在提取質粒的同時去除痕量蛋白及其它雜質，提取的高純度質粒DNA可多至70μg，適用于需較大量質粒的動物細胞轉染等分子生物學實驗。

產品特點：
·高純度：提取的質粒DNA可直接用于轉染等高要求實驗。
·快速：步驟少，操作簡單，節省時間。
·高 效：可提取菌體85%以上質粒DNA。

質粒得率：

質粒類型	處理量	得率	質粒
高拷貝質粒	5-15ml	15-70μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷貝質粒	5-15ml	5-25μg	pBR322,pACYC及其衍生載體pSC101 及其衍生載體，SuperCos,pWE15

試劑盒組成：

組分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	30ml
溶液P2	30ml
溶液P3	40ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脫緩沖液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	300μl
過濾柱CS	50個
吸附柱CP4	50個
收集管（2ml)	100個

保存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個月；更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產生沉淀，使用前應先將試劑盒內的溶液在室溫中放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10min以溶解沉淀。單獨包裝的RNase A在室溫可穩定保存12個月。加入RNase A和BaiRed后的溶液P1應置于2-8℃保存，可穩定保存6個月。

注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（將試劑盒中提供的RNase A全部加入），混勻，置于2-8℃保存。
2．使用前先檢查平衡液BL、溶液P2和P3是否出現渾濁，如有渾濁現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。
3．注意不要直接接觸溶液P2和P3，使用后應立即蓋緊蓋子。
4．所有離心步驟均為使用臺式離心機室溫下進行離心，速度為12000rpm （~13400×g )。
5．提取的質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10kb的大質粒，應加大菌體使用量，同時按比例增加P1、P2、P3的用量，洗脫緩沖液應在65-70℃預熱。可以適當的延長吸附和洗脫的時間，以增加提取效率。
6．實驗前使用平衡液BL處理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基質膜，提高得率。
7．用平衡液BL處理過的柱子zuì好當天使用，放置時間過長會影響效果。

使用方法：
使用前請先在漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。

1．柱平衡步驟：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）
2．取5-15ml過夜培養的菌液加入離心管中，12000rpm （~13400×g )離心1 min，盡量吸除上清。
  注意：菌液較多時可以通過幾次離心將菌體沉淀收集到一個離心管中,菌體量以能夠充分裂解為佳，過多的菌體裂解不充分會降低質粒的提取效率。
3．向留有菌體沉淀的離心管中加入500μl溶液P1 （請先檢查是否已加入RNase A），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。
  注意：請務必徹底懸浮細菌沉淀，如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。
4．向離心管中加入500μl溶液P2，溫和地上下翻轉6-8次使菌體充分裂解。
  注意：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免打斷基因組DNA。此時菌液應變得清亮粘稠，所用時間不應超過5 min，以免質粒受到破壞。如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應減少菌體量。
5．向離心管中加入700 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，此時會出現白色絮狀沉淀。12000rpm （~13400×g )離心10min，此時在離心管底部形成沉淀。
  注意：P3加入后應立即混合，避免產生局部沉淀。如果上清中還有微小白色沉淀，可再次離心后取上清。
6．將上一步收集的上清液分次加入過濾柱CS（過濾柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )離心2 min，小心地將離心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中），（如果過濾柱中有殘余的液體說明步驟5吸取的上清中雜質過多，可以延長離心的時間；如果離心后收集管底部有少量的沉淀，盡量地吸取上清）。
7．12000rpm （~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
8．向吸附柱CP4中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
9．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12000rpm（~13400×g )離心1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CP4放入收集管中。
  注意：加入漂洗液PW后，如果室溫靜置2-5 min，有助于更好地去除雜質。
10．重復操作步驟9。
11．將吸附柱CP4重新放回收集管中置于12000rpm （~13400×g )離心2 min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應（酶切、PCR等）實驗。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響，建議將吸附柱CP4開蓋，置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
12．將吸附柱CP4置于一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加100-300 μl洗脫緩沖液TB，室溫放置2 min，12000rpm （~13400×g )離心1 min將質粒溶液收集到離心管中。
  注意：洗脫緩沖液體積不應少于100 μl，體積過小影響回收效率。且DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解，洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液，應保證其pH值在7.0-8.5范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。為了增加質粒的回收效率，可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2 min，12000rpm（~13400×g )離心2 min，將質粒溶液收集到離心管中。

質粒DNA濃度及純度檢測：
1．得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。電泳可能為單一條帶，也可能為2到3條DNA條帶，這主要與提取物培養時間長短、提取時操作劇烈程度等有關。OD₂₆₀值為1相當于大約50 μg/ml雙鏈DNA。
2．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值應為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會偏低，但并不表示純度低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值。

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名稱：非凍型血液DNA保存液
貨號：BTN60910
規格：250mL
本品是在室溫條件下長期保存用于DNA提取的血液樣品的保存液，它通過裂解細胞并抑制DNase的活性而達到長期保證DNA分子的完整性。

產品特點：
1. 保存時間長，可常溫保存血液DNA 長達六個月，尤其適合于野外血液樣品采集。
2. DNA 完整性好，純化后長度在20-50 Kb之間。
3. DNA 無化學修飾，提得的DNA可用于酶切、電泳、Southern雜交和PCR等分子生物學實驗。
4.適用于各種動物血液(包括禽類血液)。
5. 安全可靠，本產品無害。
6. 使用簡單，直接把新鮮的血液樣品與本產品混合即可。

儲存條件：室溫運輸及保存，有效期兩年。

使用方法：

一: 哺乳動物血液(包括人血液)
1. 將抗凝血(1-10mL)加入到適當容量的塑料離心管中。
2. 加入等體積的血液DNAhold，充分振蕩混合均勻。
3. 常溫閉光保存直到使用。
4. 提取DNA時，可以取出部分液體，用自備的蛋白酶K(終濃度為0.1mg/mL)37℃處理過夜，然后再用經典的酚/氯fǎng抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽類血液
由于禽類血液有核細胞量遠高于哺乳動物，血液的使用量很少，一般只有哺乳動物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等體積的水將血液DNAhold稀釋，然后直接將禽類血液加入。其余操作同上。

名稱：血液細胞核DNA和線粒體DNA共提試劑盒
貨號：BTN120810
規格：25次
本試劑盒是在本公司血液DNA提取試劑盒產品基礎上開發的、專門用于從新鮮或冷凍的哺乳動物抗凝全血中同時提取細胞核DNA和線粒體DNA的試劑。

產品特點：
1.一份樣品可以同時得到細胞核DNA和線粒體DNA，節約寶貴的實驗材料。
2. DNA產率高。細胞核DNA產率一般為30-50μg/mL 新鮮血液，線粒體DNA產率約為1μg/mL 新鮮血液。陳舊血液DNA產率差別較大。
3. DNA 純凈，OD260/OD280在1.8-2.0 之間，可直接用于PCR、酶切、雜交等實驗。
4.適用于哺乳動物血液，不適用于其他動物血液。
5. 所用試劑安全，健康環保。

試劑盒組成：

成分	規格
紅細胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脫液2.0	10ml
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白細胞核和線粒體的分離
1. 將3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鮮血液轉移到一個干凈的15mL塑料離心管中。注意：zuì好使用新鮮血液。對于陳舊血液，由于凍凝過程中冰晶已經對細胞核膜和線粒體膜產生損傷，所以DNA 得率會大大減少，具體減少多少根據凍凝時間長短不同而不同。
2. 向血液中加入等體積(3mL)的D型紅細胞裂解液；輕柔顛倒數次混勻，室溫靜置10分鐘以裂解紅細胞和白細胞的細胞膜，直至溶液變成清澈的紅色。注意：D型紅細胞裂解液一旦打開后，非常容易污染細菌，未用完的部分zuì好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分搖勻。
3.室溫下1000 g離心10分鐘沉淀白細胞核。
4.轉移上清(含線粒體)到新的15mL塑料離心管中，注意不要觸及白細胞核沉淀。
5.在白細胞核沉淀中加入3mL D型紅細胞裂解液。輕柔顛倒數次混勻后，室溫下1000 g離心10分鐘以沉淀白細胞核。
6.轉移上清(含線粒體)到第4 步所得的、已經含有上清的15mL塑料離心管中。
將白細胞核沉淀放置冰上，和即將準備好的線粒體一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 將匯集的含線粒體的上清于4℃下15000g離心30分鐘。
8.小心移棄上清，小心將線粒體沉淀重懸在1mL D型紅細胞裂解液中，然后轉移到1.5mL塑料離心管中，15000g離心5分鐘，移棄上清得到線粒體沉淀。
9. 用1mL D型紅細胞裂解液洗滌線粒體2次(每次先重懸線粒體，再15000g離心5分鐘得沉淀)。
10. 所得線粒體可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步驟為白細胞核DNA提取和線粒體DNA提取通用)
11.在白細胞沉淀或線粒體沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液槍吹打數次混勻后再加入75μL溶液B，混勻后于55℃溫育10分鐘。注意：溶液將成渾濁狀。
12. 再加入0.2mL溶液C充分顛倒混勻。
13.在4℃下13000g離心20分鐘后，將上清(含DNA)轉入一新的1.5mL塑料離心管中。
14. 加入兩倍體積的自備無水乙醇充分震蕩混勻后，室溫13000 g離心5分鐘，去盡上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混勻后室溫13000g離心5分鐘，去盡上清。
16. 重復上步一次。
17. 短暫離心，去盡殘留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暫晾干半分鐘，加入適量DNA 洗脫液2.0 溶解DNA(對細胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脫液2.0，對線粒體DNA，可加入50μL DNA 洗脫液2.0)。
19. 65℃保溫15分鐘以便徹底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后續的OD 檢測、酶切、PCR或其他實驗，也可以放置在-20℃長期保存。

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