BTN120510 ATP依賴的DNase

ATP依賴的DNase的品牌是百奧萊博,是優(yōu)質(zhì)的工具酶產(chǎn)品,本制品用于生化實(shí)驗(yàn)研究等領(lǐng)域,本品質(zhì)量穩(wěn)定,價(jià)位合理,需要ATP依賴的DNase等工具酶產(chǎn)品的客戶,請(qǐng)到我公司官網(wǎng)聯(lián)系我們。...
特別提示:包括ATP依賴的DNase在內(nèi),本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱:ATP依賴的DNase
英文名稱:ATP Dependent Dnase
產(chǎn)品貨號(hào):BTN120510
產(chǎn)品規(guī)格:200U
在含有ATP的Buffer反應(yīng)體系中,本產(chǎn)品能夠特異性地水解線性雙鏈DNA產(chǎn)生脫氧核糖核酸,但對(duì)環(huán)狀雙鏈DNA不起作用。本產(chǎn)品可用于除去質(zhì)粒或粘粒等環(huán)狀DNA樣品中殘留的少量線性基因組DNA片段的污染,減少對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響。在基因工程實(shí)驗(yàn)中,制備的質(zhì)粒和粘粒,即使是通過氯化銫/溴乙錠梯度離心方法或其它嚴(yán)格的方法制備,也常含有堿裂解操作過程中帶來的少量細(xì)菌基因組DNA片段的污染,尤其在制備低拷貝克隆載體的質(zhì)粒或粘粒等時(shí),這種現(xiàn)象更為明顯,使用本產(chǎn)品即可以有效的去除這些污染。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.使用本制品可以有效除去樣品中的基因組DNA,然后通過70℃、5 min的加熱處理即可使酶完全失活,從而減少基因組污染物對(duì)質(zhì)粒或粘粒等的常規(guī)分析、亞克隆和序列測(cè)定等后續(xù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
2.此產(chǎn)品可用于低拷貝的質(zhì)粒或粘粒的提取及除去質(zhì)粒等環(huán)狀DNA中線性基因組DNA污染物。
儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期一年。
活性定義:以線性化的pMD18 DNA為底物,在1mM ATP存在、pH9.4緩沖液中,37℃反應(yīng)30分鐘,催化生成1nmol脫氧核苷酸所需要的酶量,定義為1活性單位。在10μL反應(yīng)體系中,加入本產(chǎn)品0.2 U,10×ATP依賴的DNA酶Buffer 1μL,0.2μg的線性化的pMD18 DNA,在37℃條件下反應(yīng)30分鐘,能夠使線性化的pMD18 DNA產(chǎn)生95%以上的降解作用。
使用方法:
使用本產(chǎn)品除去 pUC18質(zhì)粒中含有的大腸桿菌基因組DNA片段污染物(占60%),可以提高陽性克隆的比率。
1.在微量離心管中配制下列反應(yīng)液:
成分 | 樣品 | 對(duì)照 |
10×反應(yīng)Buffer | 1μL | 1μL |
pUC18質(zhì)粒DNA混合物 | 1μg | 1μg |
ATP依賴的DNA酶 | 2U | - |
dH2O | Up to 10μL | Up to 10μL |
2.37℃反應(yīng)2小時(shí)。長時(shí)間反應(yīng)效率有下降的傾向,建議反應(yīng)時(shí)間1~2小時(shí)。
3.70℃加熱5分鐘,使ATP依賴的DNA酶失活。
4.在微量離心管中制備下列酶切反應(yīng)液:
成分 | 用量 |
10×H Buffer(客戶自備) | 1μL |
第3步反應(yīng)液 | 5μL |
EcoR I(客戶自備) | 30U |
dH2O | Up to 10μL |
5.37℃反應(yīng)1小時(shí)之后,進(jìn)行60℃ 15 min反應(yīng),使EcoR I失活。
6.在微量離心管中制備下列連接反應(yīng)液:
成分 | 用量 |
10×T4 DNA Ligase Buffer(客戶自備) | 1μL |
第5步酶切反應(yīng)液 | 2μL |
T4 DNA Ligase(客戶自備) | 350 U |
dH2O | Up to 10μL |
7.16℃反應(yīng)1小時(shí)。
取上述連接反應(yīng)液2~10μL,轉(zhuǎn)化到JM109感受態(tài)細(xì)胞中,涂平板培養(yǎng),進(jìn)行藍(lán)白菌落篩選并計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,使用ATP依賴的DNA酶處理的pUC18質(zhì)粒DNA混合物(含60%大腸桿菌基因組DNA片段)的自連結(jié)果中,白色菌落減少80%以上,有效抑制了大腸桿菌基因組DNA的污染。
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