高純質粒大量提取試劑盒由北京百奧萊博供貨并提供相關技術服務支持，本品用于科學研究，本產品質量好，且具價格，深為用戶稱道，了解更多高純質粒大量提取試劑盒等DNA提取純化產品請聯系我司咨詢訂購。...

特別提示：包括高純質粒大量提取試劑盒在內，本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！

產品名稱：高純質粒大量提取試劑盒
英文名稱：High Purity Plasmid Mass Extraction Kit
產品貨號：WH0031
產品規格：10次

本試劑盒采用獨特的緩沖系統，同時加入我公司特制的顏色指示劑，保證更有效地得到大量高純度質粒。使用本試劑盒可根據不同的實驗需求，靈活地選擇處理菌液的初始體積，并采用傳統的異丙醇沉淀方法，快速地獲得大量高純度的質粒DNA，滿足多種不同的后續實驗需求。使用本試劑盒提取的質粒DNA可適用于各種常規操作，包括酶切、PCR、測序、連接、轉化和轉染多種細胞等實驗。

產品特點：
·得率高：異丙醇直接沉淀，zuì高可獲得1.5mg質粒DNA。
·純度好：經緩沖液P4和過濾器CS處理，滿足多數轉染實驗要求。
·簡便快捷：只需簡單的幾步離心，1小時左右完成實驗。
·應用廣泛：適用于酶切、PCR、轉化、測序和轉染等分子生物學實驗，顏色指示劑使您的質粒提取效率更有保證。

提取實例：

用本試劑盒提取100ml菌液的pEGFP質粒（OD600=1.95)和pCMV質粒（OD600=2.05)

質粒得率：

質粒類型	處理量	得率
高拷貝質粒	菌液100ml	500μg～1.5mg質粒
低拷貝質粒	菌液200ml	200μg～400μg質粒

試劑盒組成：

組分	10T
溶液P1	100ml
溶液P2	100ml
溶液P4	100ml
顏色指示劑	500μl
洗脫緩沖液TB	30ml
RNase A（100mg/ml)	500μl
過濾器CS1	10個

保存條件：室溫（15-25℃)干燥條件下，可保存12個月，更長時間的保存可置于2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產生沉淀，使用前應將試劑盒內的溶液在室溫放置一段時間，必要時可在37℃水浴中預熱10min，以溶解沉淀。次使用前將RNase A加入溶液P1中，混勻后置于2-8℃保存，可穩定保存12個月以上。單獨包裝的RNase A在室溫可穩定保存12個月以上。

注意事項：（請務必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項)
1．溶液P1在使用前先加入RNase A（將試劑盒中提供的RNase A全部加入），混勻，置于2-8℃保存。
2．使用前先檢查溶液P2和P4是否出現結晶或者沉淀，如有結晶或者沉淀現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。
3．自備約60ml的5M NaCl溶液。
4．注意不要直接接觸溶液P2和P4，使用后應立即蓋緊蓋子。
5．使用過濾器時請將推柄小心緩慢地從過濾管中抽出，避免濾膜因壓力而松動。
6．提取的質粒量與細菌培養濃度、質粒拷貝數等因素有關。如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10 kb的大質粒，應加大菌體使用量，同時按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脫緩沖液推薦在65-70℃水浴中預熱。
7．顏色指示劑的使用方法：顏色指示劑用以指示整個操作的正確性，對人體無害。顏色指示劑為可選試劑，客戶根據需求選擇是否添加。如果提取質粒后需要進行轉染實驗，不建議客戶在實驗中加入顏色指示劑。使用時按照顏色指示劑:溶液P1=1:200進行混合，徹底顛倒混勻，混勻后的溶液為澄清的紅色。將混勻后的溶液加入到收集好的菌體中徹底混勻，由于菌體的存在，混勻后的溶液為渾濁的紅色；添加P2之后徹底混勻后，溶液的顏色為澄清的紫色，則說明充分裂解；再添加溶液P4至徹底混勻后，溶液為澄清的黃色，說明中和復性充分。

顏色指示劑：

圖1：菌體中加入含顏色指示劑的P1溶液，徹底混勻后溶液為渾濁的紅色
圖2：添加P2徹底混勻后，溶液顏色為澄清的紫色。如果在紫色中混有渾濁的紅色，則裂解不充分，會大大影響質粒的提取效率，需繼續混勻至顏色變為澄清的紫色。
圖3～4：添加P4徹底混勻后，溶液顏色為澄清的黃色。如果在黃色中混有紫色（圖3所示)，則復性不充分，會導致得到的雙螺旋質粒量減少，需繼續混勻至顏色變為澄清的黃色（圖4所示)。

使用方法：

1．取100 ml （根據培養菌體的濃度選擇合適的量，低拷貝推薦用200 ml)過夜培養的菌液，室溫10000rpm （~11500×g )離心3 min收集細菌。
  注意：菌液較多時，可多次離心并將菌體沉淀收集到一個離心管中。
2．盡量吸除上清，為確保上清液全部吸取，請倒置干凈的吸水紙上。
3．向留有菌體沉淀的離心管中加入10 ml溶液P1（請先檢查是否已加入RNase A)，使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉淀。
注意：請務必徹底混懸，如果有未徹底混勻的菌塊，會影響裂解，導致提取量和純度偏低。顏色指示劑的加入對于后續PCR、酶切和測序都沒有影響。使用時按照顏色指示劑:溶液P1=1:200進行混合，徹底顛倒混勻，混勻后的溶液為澄清的紅色。將混勻后的溶液加入到收集好的菌體中徹底混勻，由于菌體的存在，混勻后的溶液為渾濁的紅色。如果提取質粒后需要進行轉染實驗，不建議客戶在實驗中加入顏色指示劑。
4．向離心管中加入10ml溶液P2，立即溫和地上下翻轉6-8次，使菌體充分裂解，室溫放置5min。
  注意：溫和地混合，不要劇烈震蕩，以免污染基因組DNA。此時菌液應變得清亮粘稠，如果未變得清亮，可能由于菌體過多，裂解不徹底，應減少菌體量。
  如果使用了顏色指示劑，添加P2之后徹底混勻后，溶液的顏色為澄清的紫色。如果在紫色中混雜有渾濁的紅色，則說明裂解不充分，繼續混勻直至溶液顏色完全變為澄清的紫色。
5．向離心管中加入10 ml溶液P4，立即溫和地上下翻轉6-8次，充分混勻，至溶液出現白色分散絮狀沉淀。然后室溫放置10min左右。10000rpm （~11500×g )離心5-10min，使白色沉淀離至管底（可適當增加離心時間），將全部溶液小心倒入過濾器CS1中（請避免倒入大量沉淀而阻塞過濾器），慢慢推動推柄過濾，濾液收集在干凈的50 ml的管中（客戶自備）。
  注意：加入溶液P4后應立即混勻，避免產生局部沉淀。如果離心后倒入過濾器CS1中的溶液有白色沉淀也不會影響過濾。如果菌體過多（>100 ml），推薦延長離心時間至20-30 min。
  如果使用了顏色指示劑，添加溶液P4之徹底混勻后，溶液為澄清的黃色，如果在黃色中混有紫色，則說明復性不充分，繼續混勻至溶液顏色完全變為澄清的黃色。
6．向濾液中加入0.35倍濾液體積的異丙醇和1/2倍異丙醇體積的5M NaCl，上下顛倒充分混勻。
  注意：若此處無沉淀出現為正常現象。
7．4℃ 10000rpm （~11500×g )離心30 min，輕輕倒掉上清液，將其倒置在吸水紙上。
8．向管中加入6 ml 70%乙醇充分漂洗沉淀，4℃ 10000rpm （~11500×g )離心10min，輕輕倒掉上清液，將其倒置在吸水紙上。
9．重復操作步驟8。
10．將離心管敞口室溫放置10-20 min，使乙醇充分揮發后加入1-1.5 ml洗脫緩沖液TB，充分溶解沉淀。
  注意：洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應保證其pH值在7.5-8.0范圍內，pH值低于7.0會降低洗脫效率。洗脫緩沖液用量的多少主要是依據質粒的拷貝數以及實驗所需要的濃度來確定。洗脫緩沖液體積不少于1 ml，體積過小影響回收效率。DNA產物應保存在-20℃，以防DNA降解。

質粒DNA濃度及純度檢測：
1．得到的質粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。電泳可能為多條帶，這些條帶是質粒的多聚體造成的，不影響后續的酶切、轉染等實驗。OD₂₆₀值為1相當于大約50μg/ml雙鏈DNA。
2．純化的質粒DNA OD₂₆₀/OD₂₈₀通常在1.8-2.0左右，可直接應用于分子生物學等常規操作。如果溶解時不使用緩沖液，而使用ddH2O，比值會偏低，但并不表示純度低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值。

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貨號	名稱	規格
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名稱：非凍型血液DNA保存液
貨號：BTN60910
規格：250mL
本品是在室溫條件下長期保存用于DNA提取的血液樣品的保存液，它通過裂解細胞并抑制DNase的活性而達到長期保證DNA分子的完整性。

產品特點：
1. 保存時間長，可常溫保存血液DNA 長達六個月，尤其適合于野外血液樣品采集。
2. DNA 完整性好，純化后長度在20-50 Kb之間。
3. DNA 無化學修飾，提得的DNA可用于酶切、電泳、Southern雜交和PCR等分子生物學實驗。
4.適用于各種動物血液(包括禽類血液)。
5. 安全可靠，本產品無害。
6. 使用簡單，直接把新鮮的血液樣品與本產品混合即可。

儲存條件：室溫運輸及保存，有效期兩年。

使用方法：

一: 哺乳動物血液(包括人血液)
1. 將抗凝血(1-10mL)加入到適當容量的塑料離心管中。
2. 加入等體積的血液DNAhold，充分振蕩混合均勻。
3. 常溫閉光保存直到使用。
4. 提取DNA時，可以取出部分液體，用自備的蛋白酶K(終濃度為0.1mg/mL)37℃處理過夜，然后再用經典的酚/lǜ仿抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽類血液
由于禽類血液有核細胞量遠高于哺乳動物，血液的使用量很少，一般只有哺乳動物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等體積的水將血液DNAhold稀釋，然后直接將禽類血液加入。其余操作同上。

名稱：柱式植物葉綠體DNA提取試劑盒
貨號：BTN120406
規格：15次
本試劑盒是結合植物葉綠體純化試劑盒和柱式植物DNA抽提試劑盒而推出的新興產品,專門用于植物葉綠體DNA的快速提取。

試劑盒特點：
1. 純度高,不含污染和抑制劑,可以直接用于酶切、PCR、real-time PCR、 mμLtiplex PCR、RAPD、RFLP、AFLP、Southern Blotting，microsatellite analysis等各種后續分子生物學實驗,不會發生離心柱堵塞現象。
2.產率一般在1-2μg/1g葉片樣品。OD260/280一般在1.8以上。DNA片段長度一般在40-50Kb左右。
3. 本產品足夠15次提取,每次可處理30g葉片。
4. 已經成功用于菠菜,大豆,萵筍,白菜,煙草和甜菜等雙子葉植物,也適用于單子葉等其他植物(可能需要優化條件)。

試劑盒組成：

成分	規格
葉綠體純化勻漿液成分一	250mL×2
葉綠體純化勻漿液成分二	3g
Percoll	60mL
帶柄尼龍濾膜	1個
葉綠體DNA純化溶液A	15mL
葉綠體DNA純化溶液B	7.5mL
葉綠體DNA純化溶液C	30mL
離心吸附柱	15套
通用洗柱液	15mL
DNA洗脫液2.0	10mL
說明書	1份

儲存條件：常溫運輸和保存(但勻漿液成分二長期保存時需要放4℃)，保存期限一年。

使用方法：
注意：葉綠體對溫度高度敏感,所以整個操作必須在冰上或者在冷室進行,所用器皿和溶液均需要在4℃預冷。離心時一定要在4℃進行,離心力以g而不是rpm計算。如果需要研究葉綠體的功能,提取還需要在昏暗的光線條件下進行。強烈建議用顯微鏡監控整個過程中葉綠體的回收情況。

一：葉綠體的純化
1.實驗前1-2天將植物放在暗室培養以減少葉綠體中淀粉顆粒的形成,否則離心時這些顆粒很容易使葉綠體破裂。葉片在實驗前需先用自來水洗凈,再用蒸餾水淋洗,去掉多余水分。如果葉片采集后不能立即處理,則保存時需要保持葉片濕潤,即使如此,葉片的放置時間也不能超過一天。
2.計算實驗所需葉綠體勻漿液的體積(下面簡稱勻漿液),本試劑盒一次實驗可處理30 g葉片,對一般植物,每克葉片需要準備4mL勻漿液,則一次實驗需要準備120mL勻漿液。對煙草和大豆,每克葉片需要6mL勻漿液,則一次實驗需要準備180mL勻漿液。為了保險可以多配10%。
3.實驗當天制備勻漿液。制備方法是：將自備的去離子水與試劑盒提供的勻漿液成分一在干凈的玻璃或塑料容器中按4：1的比例混合,然后在每100mL混合液中加入勻漿液成分二干粉0.1g(終濃度為0.1%),輕柔攪拌10分鐘后,所得溶液即為勻漿液。冰上預冷待用。勻漿液只能當天使用,不能放置。
4.預留1.5mL用于懸浮葉綠體,其余勻漿液轉移到Waring勻漿機(即家用制備果汁的勻漿機)中,再快速將新鮮植物葉片的葉脈去除,再將葉片剪成1-3cm2大小的碎片,浸泡在勻漿機里面的勻漿液中。
5.低速勻漿10秒,避免起泡沫。用玻璃棒把液面的葉碎片按入到勻漿機底部,再低速勻漿10秒。
 注意：還可用Dounce玻璃勻漿器,Polytron勻漿機和研磨(加玻璃珠)等勻漿,但它們單次處理量小,需分成很多份處理后再匯集,非常不方便。
6.用帶柄尼龍濾膜過濾勻漿液,用預冷的200mL量筒收集穿透液,再等分到4個預冷的50mL的塑料離心管中(每個管中的穿透液不要超過35mL)。帶柄尼龍濾膜洗滌干凈后可反復使用。
7.在水平轉子離心機上4℃ 200g離心3分鐘(對菠菜,白菜和萵筍材料)或400g離心1分鐘(對甜菜材料),白色沉淀為未破裂的細胞或細胞核。其他植物材料則需要用戶自己摸索zuì佳離心力。
8.將上清液(含葉綠體)轉移到一個新的、預冷的50mL塑料離心管中。
9.在水平轉子離心機上4℃ 1000g離心7分鐘,小心棄上清,沉淀含葉綠體。
10.在沉淀中加入1.5mL預冷的勻漿液,手彈離心管底部使葉綠體重懸。
 注意：重懸時zuì好避免溶液起泡,也不要用槍頭吹打,否則葉綠體容易破裂。沉淀下有白色淀粉屬于正常現象,但重懸葉綠體時避免將白色淀粉重懸。
11.將4管葉綠體重懸液匯集(共約6mL),得到葉綠體粗提液。
12.如果對葉綠體DNA是否含細胞核DNA的要求不高,則葉綠體粗提液可以直接用于葉綠體DNA純化,具體操作是在水平轉子離心機上4℃ 1000g離心7分鐘,小心棄上清,沉淀為葉綠體,直接用于DNA純化(見步驟二)。
13.如果需要無細胞核DNA污染的葉綠體DNA,則按以下流程操作：在50mL塑料離心管中先加入6mL勻漿液成分一和4mL的Percoll,充分混合均勻得到40%的Percoll溶液,在其液面上小心鋪上6mL的葉綠體粗提液,在水平轉子離心機上4℃ 1700g離心6分鐘,管底綠色沉淀為完整的葉綠體,液面的綠色部分為破碎的葉綠體。小心將上清去除后,直接將沉淀(完整葉綠體)用于葉綠體DNA純化(見步驟二)。

二：葉綠體DNA的純化(溶液A和溶液B容易產生沉淀,溶液B十分粘稠,均需65℃溶解并搖勻后待用)
14.將600μL預熱的溶液A加入到葉綠體沉淀中后充分吹打混勻。
15.加入300μL預熱的溶液B,震蕩混勻10-30秒。
 注意：溶液B非常粘稠,可以采取稱量方法稱取300mg(約等于300μL)使用或將1mL槍頭剪去一截后再吸取300μL使用。
16.65℃放置3～5分鐘。如果室溫放置,DNA產量會降低10-20%。
17.加入200μL自備lǜ仿,震蕩混勻10-30秒。
18. 12000rpm室溫離心2分鐘。此時上清液將變得透明,中間層有白膜。小心轉移上清液(約0.8mL)到一個新的3-5mL離心管中,避免觸及中間層的白膜,可留少量上清不取。
19.加入1.5倍體積(約1.2mL)的溶液C,顛倒混勻后先轉移0.7mL到離心吸附柱中,室溫放置至少2分鐘。12000rpm室溫離心1分鐘,DNA將吸附在離心吸附柱的膜上,倒棄收集管中的穿透液。
20.再將剩余的溶液按上步方法上柱。
21.將0.5mL通用洗柱液加入到吸附柱中,12000rpm室溫離心1分鐘,棄穿透液。重復操作一次。空甩半分鐘去除殘留液體。
22.將離心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料離心管中,加50-100μL DNA洗脫液2.0,室溫放置3～5分鐘。
23.12000rpm室溫離心1分鐘即得植物葉綠體DNA溶液,直接取5-10μL電泳檢測,其余放冰箱備用。

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