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ELISA測(cè)定試劑盒手工操作方法

發(fā)布時(shí)間:2017-06-09瀏覽次數(shù):1711返回列表

導(dǎo)讀:ELISA測(cè)定試劑盒是用于體外定性檢測(cè)人血清或血漿中的抗人類戊型肝炎(HEV)病毒 IgM 抗體ELISA檢測(cè)。ELISA試劑盒試驗(yàn)是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
ELISA測(cè)定試劑盒手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種,浸泡式進(jìn)程如下:
A、吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液;
B、用洗刷液過(guò)洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去);
C、浸泡,即將洗刷液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖晃,浸泡時(shí)間不可隨意縮短;
D、吸干孔內(nèi)液體,吸干應(yīng)徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清洗毛巾或吸水紙上拍干;
E、重復(fù)操作c和d,洗刷3-4次(或按說(shuō)明規(guī)矩)。
ELISA測(cè)定試劑盒操作技術(shù)的影響:
1)應(yīng)保證清潔,整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸,以上的措施可以使“花板”降至低限度,從而提高檢測(cè)的特異性,并得到更準(zhǔn)確。 
2)合理安排檢測(cè)量,ELISA試劑盒以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
3)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
4)用洗板機(jī)洗板時(shí),保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干,防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
5)嚴(yán)重溶血:以HRP為標(biāo)記的ELISA試劑盒測(cè)定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過(guò)氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽(yáng)性。
減少ELISA測(cè)定試劑盒誤差的方法
1.做實(shí)驗(yàn)時(shí)少說(shuō)話,防止唾液掉進(jìn)酶標(biāo)條中。
2.加入一抗二抗需要放入37°。
3.如果同時(shí)做多個(gè)板子,多個(gè)板子別羅一起;盡量少用排槍。
4.加樣時(shí),由低濃度向高濃度加,這樣減少跳孔的幾率。
5.勤換槍頭。
一、移液器的使用,加樣(抗體)等需要準(zhǔn)確定量的試劑時(shí)不使用排槍,經(jīng)驗(yàn)證明排槍很不準(zhǔn)確,易跳孔,不要圖買低檔的tips 因?yàn)镋LISA不但會(huì)放大被檢測(cè)的目的蛋白,也會(huì)放大非特異結(jié)合的雜質(zhì)蛋白。
二、倍比稀釋樣品時(shí),稀釋倍數(shù)要小于10。
三、所有的裝跟ELISA測(cè)定試劑盒相關(guān)試劑的容器,玻璃制品的要干烤過(guò)或者使用一次性的樹(shù)脂容器。