人β神經生長因子(NGF-β)酶聯免疫試劑盒技術資料

  包裝描述：

  試劑名稱數量試劑名稱數量

  96孔板(預包被)196孔板覆膜2

  標準品2標準品稀釋液1×20mL

  檢測溶液A1×120μL檢測稀釋液A1×12mL

  檢測溶液B1×120μL檢測稀釋液B1×12mL

  TMB底物1×9mL終止液1×6mL

  濃洗滌液(30×)1×20mL說明書1

  測定步驟總結

  1.準備所有試劑，樣品和標準品;

  2.向每個孔中添加100μL標準液或樣品。在37℃下孵育2小時;

  3.吸出并加入100μL準備好的檢測試劑A。在37℃孵育1小時;

  4.吸凈并清洗3次;

  5.加入100μL制備的檢測試劑B。在37℃孵育1小時;

  6.吸氣并清洗5次;

  7.添加90μL底物溶液。在37℃下孵育15-25分鐘;

  8.添加50μL終止液。立即在450nm處讀取。

  需自備的設備及試劑

  450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)

  單道或多道微量加液器及吸頭

  稀釋樣品的EP管

  蒸餾水或去離子水

  吸水紙

  盛放洗液的容器

  試劑盒的儲存及有效期

  未開封的試劑盒：所有試劑均按試劑瓶標簽上所示保存。請注意，收到試劑盒后請盡快將TMB 洗滌液，終止液保存于4℃，其他試劑保存于-20℃。

  使用后的試劑盒：剩余試劑仍需按照試劑瓶標簽所示的溫度保存，開封后的酶標板要加干燥劑后密封保存于-20℃，避免潮濕。

  穩定性

  經測定，試劑盒在有效期內按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。

  為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實驗室的環境條件需盡量保持一致，尤其是實驗室內溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實驗員來進行操作可減少人為誤差。

  注意：

  試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用;使用后的剩余試劑盒建議在首次實驗后 1個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩定的。

  ELISA實驗常見問題分析

  ELISA實驗因靈敏度高，特異性強在生物科研上得到了廣泛的認可，但對初學者而言，如不注意實驗操作過程中的各個環節，可能會對終的實驗結果產生比較大的影響，比如實驗出現白板，顯色弱靈敏度低，花板無梯度背景高等現象。下面對以上實驗現象進行一一解析。

  1.白板現象

  在完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色后，酶標板中所有孔的顏色均為無色，即無信號呈現。

  出現該現象的可能原因：

  a.試劑已過保質期，不同批次稀釋液交叉使用。

  b.錯加漏加檢測A，檢測B或者底物溶液TMB。

  c.洗板或者加樣過程中，酶標記物被污染失活，稀釋液中含有酶抑制劑如疊氮吶等。

  d.配置稀釋液的蒸餾水可能被污染。

  e.洗滌液是濃縮型的，沒有按比例進行稀釋。

  f.酶標記物的活性和效價比較低。

  g.溶液的PH值不正確，一般稀釋液的PH值應保持在7.2-7.4。

  2.顯色弱靈敏度低

  在完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色后，酶標板中孔的顯色比較淺，即只有微弱的信號呈現。

  出現該現象的可能原因：

  a.產品過有效期，試劑沒有按規定進行適當的保存。

  b.試劑，標準品或者樣品在使用前沒有平衡到室溫。

  c.少加了試劑的量或者加入試劑的稀釋比例不當。

  d.洗板或者加樣過程中，酶標物受污染失活。

  e.孵育時間和孵育溫度未達到實驗要求。

  f.洗滌液稀釋倍數不符合要求，洗板次數過多，洗板沖擊力過大，洗板浸泡時間過長。

  g.底物溶液TMB顯色時間太短。

  3.花板無梯度背景高

  在完成所有實驗步驟進行底物TMB溶液顯色后，酶標板中的孔有顏色但沒有梯度，背景也可能較高.

  出現該現象的可能原因：

  a.底物溶液TMB未置于陰涼避光處保存，實驗前溶液已經變藍。

  b.孵育溫度過高或者孵育時間過長，發生了較強的非特異性吸附。

  c.沒有按說明書要求洗板，特別是洗板時洗滌液的量少加了。

  d.加樣時沒有換槍頭造成交叉污染。

  e.花板現象：低濃度或者低活性的包被抗體或者檢測抗體，封閉不足導致的本底不穩定，洗板不充分，包被板子的問題。

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