生化試劑在實驗中的常識
發布時間:2019-03-14瀏覽次數:1313返回列表
一、在重蒸酚中加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇
保存在冰箱中的酚,容易被空氣氧化而變成粉紅色,這樣的酚容易降解DNA,一般不可以使用。為了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫,不僅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。
二、提細胞基因組DNA時,通常要異戊醇可以降低表面張力,從而減少氣泡產生。另外,異戊醇有助于分相,使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
三、DNA通常保存在采用TE緩沖液,Tris-HCl的緩沖系統,加入EDTA可以螯合二價金屬離子進而抑制依賴于二價金屬離子的DNA酶的活性,對DNA起到保護作用。
四、蛋白印跡中封閉液的作用:封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位,以減少非特異性結合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
五、簡單的克隆載體必需包括: 復制起點;選擇標記:主要是抗性基因;多克隆位點:便于外源DNA的插入。
六、用酚抽提細胞DNA時的作用: 使蛋白質變性。
七、使用離心機應注意事項 先應該根據自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉子以及離心管,使用離心機時的工作轉速不應該超過離心機、轉子以及離心管的zui大允許轉速。離心前注意嚴格 平衡樣品。安裝轉子和轉子蓋要規范、準確。離心時要留人看守,發現離心機異常應立即關閉離心機。離心結束后要安放好轉子。
八、分子生物學實驗室常用的滅菌方法有:高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、化學藥劑消毒、過濾除菌
九、在分離DNA過程中,造成DNA分子斷裂的因素有: 核酸酶降解;化學降解;物理剪切。
十、在酶切反應緩沖液中加入BSA提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。
保存在冰箱中的酚,容易被空氣氧化而變成粉紅色,這樣的酚容易降解DNA,一般不可以使用。為了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羥基喹啉及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉是帶有淡黃色的固體粉沫,不僅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。
二、提細胞基因組DNA時,通常要異戊醇可以降低表面張力,從而減少氣泡產生。另外,異戊醇有助于分相,使離心后的上層含DNA的水相、中間的變性蛋白相及下層有機溶劑相維持穩定。
三、DNA通常保存在采用TE緩沖液,Tris-HCl的緩沖系統,加入EDTA可以螯合二價金屬離子進而抑制依賴于二價金屬離子的DNA酶的活性,對DNA起到保護作用。
四、蛋白印跡中封閉液的作用:封閉液的作用是封閉未吸附蛋白的部位,以減少非特異性結合背景的影響。常用的封閉液有脫脂奶粉、小牛血清等。
五、簡單的克隆載體必需包括: 復制起點;選擇標記:主要是抗性基因;多克隆位點:便于外源DNA的插入。
六、用酚抽提細胞DNA時的作用: 使蛋白質變性。
七、使用離心機應注意事項 先應該根據自己的實驗需求選擇合適的離心機和轉子以及離心管,使用離心機時的工作轉速不應該超過離心機、轉子以及離心管的zui大允許轉速。離心前注意嚴格 平衡樣品。安裝轉子和轉子蓋要規范、準確。離心時要留人看守,發現離心機異常應立即關閉離心機。離心結束后要安放好轉子。
八、分子生物學實驗室常用的滅菌方法有:高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌、化學藥劑消毒、過濾除菌
九、在分離DNA過程中,造成DNA分子斷裂的因素有: 核酸酶降解;化學降解;物理剪切。
十、在酶切反應緩沖液中加入BSA提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。