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熒光定量PCR引物與普通PCR引物設計不同點

發布時間:2023-01-16瀏覽次數:1090返回列表

熒光定量PCR引物與普通PCR引物設計不同點如下:

一、方法不同

1、普通pcr引物設計:引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。

2、熒光定量pcr引物設計:通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,標記跟蹤PCR產物進行實時監測反應,利用與之相適應的軟件對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度

二、原理不同

1、普通pcr引物設計:為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。

2、熒光定量pcr引物設計:在PCR反應體系中加入熒光基團,通過熒光信號不斷累積而實現實時監測PCR全程,然后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在實時熒光定量PCR中,對全程PCR擴增過程進行實時檢測,根據反應時間和熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。 

三、注意事項不同

1、普通pcr引物設計:引物應用核酸系列保守區內設計并具有特異性。產物不能形成二級結構。引物長度在15~30堿基之間。

1、熒光定量pcr引物設計:實時熒光定量 PCR 儀應安放在濕度較低、灰塵較少、遠離水池的平穩臺面上,不能有強光直射,室內應通風良好,無腐蝕性氣體


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