BICR 18細胞,細胞株培養
發布時間:2016-05-04瀏覽次數:974返回列表
產品名稱:BICR 18細胞,細胞株培養
中文名稱:人胚腎細胞;表達SV40T抗原人胚腎上皮細胞
規格:25T
形態特性:圓形
生長特性:懸浮生長
特征特性:該細胞穩定表達SV40大T抗原,并且促進適病毒產物的產生。
培養條件:DMEM(HG)+500ug/mlG418+10%FBS
傳代方法:1:2傳代
庫存狀態:素爾現貨
上海素爾生物提供400多種類細胞株細胞系,質量穩定,價格優惠,傳代次數少,細胞狀態良好,飽滿,有光澤,提供多項細胞復蘇服務,原代細胞和耐藥株的建立,細胞染色,STR分型鑒定。囊括歸納:1.細胞培養(代養細胞) 2.整體課題中細胞培養 3.MTT(1-48) 4.MTT(49-72) 5.MTT(73-96) 6.細胞凋亡檢測(普通) 7.細胞凋亡檢測(細胞有綠色熒光) 8.細胞周期檢測 9.質粒轉染 10.平板克隆形成 11.細胞劃痕 12.transwell 13.transwell侵襲 14.ROS活性氧檢測 15.線粒體膜電位檢測。
BICR 18細胞,細胞株培養,如需要訂購,請提供貴單位名稱、發票抬頭、收貨地址、正確郵編號,聯系方式: QQ: 張昕
具體操作
一. 實驗前準備:
1.將水浴鍋預熱至37℃
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。
二.取出凍存管:
1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
三.迅速解凍:
1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。
四.平衡離心:用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min
五.制備細胞懸液:
1.吸棄上清液。
2.向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。
六.細胞計數:細胞濃度以5×105/ml為宜。
七.培養細胞將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃和5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。
初學者易犯錯誤:
1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
2.水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。
3.離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。
4.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。
(另:冷凍細胞解凍程序)
2.1. 依據細胞株數據單之基礎培養基種類、血清種類和其它之成份和比例, 制備培養基。大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養基或不同之血清種類, 若因實驗需要, 必須有所不同時, 務必以緩慢比例漸次改變培養基組成, 確定細胞適應后, 方進行所需之實驗。
2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清),對細胞而言差異大,請務必依據細胞株資料單之血清種類培養之。
2.3. 將培養基置于 37 °C水槽中回溫,回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無菌操作臺內。取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍, 水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿, 否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化后, 以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部, 移入無菌操作臺內。
2.4. 依據細胞種類和濃度,于無菌操作臺內取 10 ml培養基加至 T25或 T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基, 混 合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養箱培養。
2.5. 對大多數細胞而言,1 % 以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活化有不良影響,不需立刻由解凍細胞中去除,待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。唯對少數因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需立即去除DMSO 者, 則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養基中,離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養基,將細胞均勻混合后, 轉移至培養瓶中, 再放入37 °C, 5 % CO2 培養箱培養。收到T25 flask 細胞時, 處理方式為︰
1. 于寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養基。請檢查flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現象,若有任何問題, 不要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。
2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C, 5 % CO2 培養箱中,使細胞回溫至37 °C, 并讓運送過程中少數脫落的細胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內取出flask內之培養基,(取出之培養基可以再使用),僅留約5-10ml 培養基于flask 內,依 一般培養方式再將細胞置入培養箱中或細胞已長滿盤, 則將細胞做傳代培養。
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