如何提高細胞凍存成功率?
發布時間:2019-05-29瀏覽次數:949返回列表
給大家講一個笑話:某小師妹跟著師兄做細胞凍存實驗,復制粘貼了每個步驟,結果復蘇的時候還是死了一大片。好笑嗎?哈哈哈,可是你們為什么要哭啊...
對于很多科研汪來說,細胞是zui脆弱又重要的寶貝之一,承擔著重要的實驗數據希望。尤其是在凍存復蘇的時候,經常會因為一些小細節導致問題。比如:
風水
出各種玄學狀況的時候,污染物是毋庸置疑的源頭,培養室的空氣、培養箱內循環的空氣、培養箱的層架以及顯微鏡的載物臺和物鏡都可能是污染源。還
有就是你自己,進入無菌間后盡量不要說話,進入無菌間后盡量不要說話,進入無菌間后盡量不要說話。打開培養箱后不能說話,打開培養箱后不能說話,打開培養箱后不能說話。
不要對著它念叨,要用你的心去感化細胞,重要的事情說三遍。
溫度
慢凍快融是細胞凍存復蘇的核心關鍵詞之一。常見的是 -4℃ → -20℃ 至 - 40℃→ -80℃ → 液氮,有著嚴格的梯度降溫。
目前更多使用程序降溫盒,將細胞凍存管放于盒內,之后再置于超低溫冰箱,程序降溫盒可控制每分鐘下降1℃,一定要避免溫度原因導致細胞自取滅亡;除非使用了成分經過優化、經過嚴格測試的凍存液,才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方,避免溫度對細胞存活的影響。
水土
解凍后的細胞要用和以前一樣的培養液和血清。因為每一種細胞都有自己特定的,并且已經熟悉了的生長環境。突然使用不一樣的培養液和血清,會造成細胞生長不良,甚至死亡。這和一個人突然離家千里,會水土不服是一樣的道理。
除了操作中的各種小細節,還有一個實驗雷區,就是配制細胞凍存液。常見的凍存液配制要遵循培養基 + 血清 + DMSO 的成分要求,根據細胞實際判斷成分配比,還建議使用程控儀,注意配制溫度,一個不小心就又會影響細胞的存活效果。所以今天,小秋給各位養細胞的科研汪們帶來一款細胞神器——HAKATA無血清細胞凍存液。
這是一款無血清即用型細胞凍存液,zui大的特點就是無需程序降溫盒及稀釋,無需分步降溫,直接使用!可在 - 80℃長期保存干細胞、腫瘤細胞和常規細胞。冷凍細胞時,用HAKATA細胞凍存液懸浮處于對數生長期的細胞,不需預冷,直接 - 80℃冷凍保存,也可用液氮快速冷凍細胞; 復蘇時用恒溫箱或者水浴鍋快速復蘇細胞即可。不僅操作方便,更能提供穩定的凍存效果,獲得更好的細胞活力。
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