高爾基體綠色熒光探針 GolgiGreen

Cat number：KFS127

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For Research Use only

一、 產品描述

高爾基體綠色熒光探針 GolgiGreen（NBD C6-神經酰胺）可以用來研究神經鞘脂類的運輸和代謝機制，也可以用來作為活細胞或固定細胞內高爾基體的選擇性染料。

NBD 染料對于環境敏感，在水中熒光信號微弱，但是在非質子溶劑和非性環境中熒光增強，Ex/Em=466/536nm。

二、 產品組分

備注：C6-NBD-CERAMIDE，分子式：C30H49N5O6 分子量：575.74。

三、 操作說明

NBD C6-神經酰胺-BSA 復合物制備

活細胞和固定細胞染色，建議使用以 BSA 復合物形式存在的 NBD C6-神經酰胺。制備方法如下：

1.1 (本試劑盒已提供)NBD C6-神經酰胺溶液，溶劑為氯fang：乙醇（體積比=19:1）。

1.2 吸取 50μL 的 NBD C6-神經酰胺儲液至小玻璃試管中，保持干燥，通入氮氣流后，保持在真空放置至 

少1小時。再以 200μL 的無水乙醇重溶。

1.3 稱取 10mL 無血清的平衡鹽溶液如，Hank’s 液+10mM HEPES，pH7.4（HBSS/HEPES）到 50mL 

塑料離心管中，加入 3.4mg（使之濃度為 0.34mg/mL）的脫脂 BSA。

1.4 渦旋混勻含有 10mL 的 BSA 溶液的試管，注入 200μL 的 NBD C6-神經酰胺乙醇溶液。渦旋震蕩。

所得到的的溶液（5 μM NBD C6-ceramide + 5 μM BSA）可以于-20 度保存。

活細胞高爾基復合體染色

2.1 用合適的緩沖液如 HBSS/HEPES 沖洗蓋玻片上的細胞。

2.2 5 μM NBD C6-ceramide + 5 μM BSA 孵育細胞，4 度，30 分鐘。

2.3 預冷的新鮮培養基多次沖洗樣品細胞，在放于 37 度另外孵育 30 分鐘。

2.4 新鮮培養基洗滌樣品，用熒光顯微鏡觀察。

固定細胞的高爾基復合體染色

染色條件同上一致，但洗滌劑和含甲醇/丙酮類的固定劑必須加以避免。

3.1 HBSS/HEPES 沖洗蓋玻片上生長的細胞，用 0.5%戊二醛/10%的蔗糖/100mM 的 PIPES，pH7.0 或者   

2~4%多聚甲醛/PBS 室溫固定 5~10 分鐘。

3.2 以預冷HBSS/HEPES 多次洗滌樣本，5μM NBD C6-神經酰胺-BSA復合物在4度下冰浴孵育30分鐘。

3.3 HBSS/HEPES沖洗，10% FBS或2mg/mL的BSA在室溫下孵育30~90分鐘，以提高高爾基體染色。

3.4 樣品洗凈，裝入并通過熒光顯微鏡觀察。