茜素紅染色試劑盒（成骨檢測(cè)，pH8.3）

Cat number：KFS128

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一、產(chǎn)品說(shuō)明

茜素紅 S 是一種蒽醌衍生物：9,10-二氫-3,4-二羥基-9,10-二氧代-2-蒽磺酸單鈉鹽，又稱媒介紅 3（Mordant Red3）或茜素磺酸鈉。其分子式為 C14H7NaO7S，分子量為 342.25。茜素紅和鈣離子以鰲和方式形成復(fù)合物，用以識(shí)別組織細(xì)胞的鈣鹽成分。鈣鹽變化是骨細(xì)胞增殖分化和骨組織成骨潛能的標(biāo)志之一。通過(guò)茜紅素染色，產(chǎn)生桔紅色沉積，但會(huì)受到其它金屬元素的干擾。

本產(chǎn)品 pH8.3 主要適用于動(dòng)物原生代或培養(yǎng)細(xì)胞的鈣沉積和鈣化結(jié)節(jié)檢測(cè)。廣泛用于骨細(xì)胞或組織病理生理的研究。

二、試劑組成

注意：以 6 孔板為例，每孔孵育的染色工作液為 500μL，本試劑盒可以做 20tests；以普通切片和 96 孔細(xì)胞為例，每張玻片孵育的染色工作液為 100μL，本試劑盒可以做 100tests。

三、自備材料

顯微鏡、載玻片、蓋玻片、無(wú)水酒精、二甲苯、中性樹(shù)膠、亮綠復(fù)染液、70%乙醇固定液(不含鈣)

四、樣本處理

1、6 孔板培養(yǎng)細(xì)胞爬片：

去除培養(yǎng)基，1×PBS（pH7.2，不含鈣鎂）洗滌細(xì)胞爬片 2 次，70%乙醇室溫固定細(xì)胞 60min，去除固定液，1×PBS（pH7.2，不含鈣鎂）洗滌細(xì)胞爬片 2 次后待用。（注意：本步驟的固定液也可用 4%多聚甲醛來(lái)替代，室溫 15-30min。）

2、冰凍切片：

冰凍切片，室溫平衡，1×PBS（pH7.2，不含鈣鎂）洗滌 2 次，待用。甲醇固定 1-2 分鐘。

3、石蠟切片：

① 脫蠟：二甲苯中脫蠟 5-10 分鐘。再換用新鮮的二甲苯，脫蠟 5-10 分鐘。

② 梯度入水：95%、70%、30%乙醇各 2 分鐘，蒸餾水 2 分鐘。

五、染色

1、茜素紅 S 染色

① 以茜素紅染色液覆蓋樣本，37℃避光孵育至少 60分鐘。(如果顏色偏淡，可以適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間。)

② 取出染色玻片，雙蒸水緩慢沖洗玻片 3-5 分鐘。（注意：細(xì)胞爬片樣本建議多用 1×PBS，pH7.2，不含鈣鎂洗滌 5 次，每次 2min，直接顯微鏡拍照觀察。）

2、亮綠染色（組織樣本可選步驟）

滴加 1-2 滴亮綠染色液覆蓋樣本，染色 20-30S。

3、分化透明處理（組織樣本可選步驟）

① 鹽酸-酒精分化液每片 100μL 覆蓋樣本 10S 后去除。

② 無(wú)水酒精脫水，二甲苯透明。

③ 封片劑封片后，顯微鏡觀察，拍照。

六、染色結(jié)果

鈣沉積陽(yáng)性細(xì)胞呈現(xiàn)桔紅色；胞漿及膠原纖維呈現(xiàn)綠色（可選）。