Nuclear Yellow [Hoechst S769121]

貨號：KFS132

保存條件：-20℃ for 24 months，避光

For Research Use only

一、試劑盒組份

二、理化性質(zhì)

分子量：651.01

外觀：淡黃色粉末溶劑：水或者 DMSO

光學特性：Excitation = 355 nm; Emission = 495 nm.

三、生物學應用

Hoechst 系列染料是一類可用于應用于熒光顯微鏡和流式細胞術(shù)分析的標記 DNA 的熒光家族染料。因其可以標記 DNA，所以這類染料被廣泛的應用于細胞核和線粒體的可視化定位。Hoechst33258 和 Hoechst33342 作為類二苯甲亞胺的染料，是其中廣泛應用的核酸染料。這兩種染料都可以被 350nm 左右的紫外光激發(fā)，發(fā)射 461nm 左右的藍紫色熒光。Hoechst 染料可以用于固定或者活細胞染色，也通常被用于另一種核酸染料的替代物，DAPI。他們之間重要的區(qū)別在于 Hoechst33342 的乙基可以使其更具有親脂性，因此更易于穿過細胞膜。在一些應用中，Hoechst33258 相比 Hoechst33342 表現(xiàn)出較差的膜透性。這類染料也常被用于檢測樣本 DNA 的含量，只需要設(shè)置一個熒光強度-DNA 含量之間的標準曲線即可。

本產(chǎn)品是一種長波的核黃染料，通用和退行性示蹤標志染料真藍做神經(jīng)元的雙色標記。在神經(jīng)元細胞中，核黃優(yōu)先染色細胞核為黃色熒光，而真藍作為一種紫外激發(fā)光激發(fā)的二價陽離子染料可以染色細胞質(zhì)為藍色熒光。兩種染料在免疫組織化學應用中的表現(xiàn)都非常穩(wěn)定，可以用于和 DAB 染料的聯(lián)合應用。當Hoechst33258、Hoechst33342 和核黃通過軸突逆行運輸?shù)侥讣毎w后，可能會遷出軸突和母細胞體，因此可以作為毗鄰神經(jīng)膠質(zhì)細胞細胞核的熒光染料。這種遷出現(xiàn)象在體內(nèi)和體外的研究中，當您將切片保存于水性環(huán)境下，都有發(fā)現(xiàn)。使用 1%示蹤劑時，活體內(nèi)的遷出現(xiàn)象可以通過限制動物的生存時間而加以控制。體外的遷出現(xiàn)象可以通過材料組織的快速處理來避免。

四、細胞染色操作說明

以下的操作程序可以應用于大多數(shù)的細胞類型，培養(yǎng)基、細胞密度和細胞的種類等因素都可能會影響您的染色。玻璃器皿上的殘留去污劑可能會影響組織染色的實際觀察效果，因為亮染色物質(zhì)可能會出現(xiàn)在溶液中，而其并非細胞。

A.樣本準備：

（1）懸浮細胞:離心收集細胞。以合適的緩沖液或不含血清酚紅的培養(yǎng)基重懸細胞，建議 pH7.4。

（2）貼壁細胞:準備蓋玻片上貼壁細胞原位染色，或者在細胞培養(yǎng)孔板中操作。

B.添加 Hoechst S769121 至終濃度 0.5~5μM.

C.避光孵育細胞 15-60min。

注意：孵育時間和染料濃度需根據(jù)實驗條件進一步摸索優(yōu)化。初始實驗中建議設(shè)計幾個染料濃度進行摸索。

D.熒光顯微鏡觀察。