神經(jīng)元綠色熒光探針 NeuroGreen

Cat number：KFS140

Store at -20℃，避光，有效期6 months

For Research Use only

一、 產(chǎn)品描述

神經(jīng)元綠色熒光探針NeuroGreen是一種長(zhǎng)鏈二烷基羰花青化合物，廣泛應(yīng)用于固定和非固定的組織與細(xì)胞中，進(jìn)行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。探針不會(huì)影響細(xì)胞的活力、生長(zhǎng)以及基本生理特性。其標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長(zhǎng)達(dá)四周，體內(nèi)長(zhǎng)達(dá)一年。染料通過(guò)在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴(kuò)散均勻標(biāo)記神經(jīng)元，0.2~0.6mm/每天/固定標(biāo)本，在活體組織里，可以達(dá)到6mm/每天。經(jīng)過(guò)醛固定的組織，探針在組織內(nèi)的標(biāo)記擴(kuò)增可以持續(xù)長(zhǎng)達(dá)1~2年。一般情況下未標(biāo)記的染料不會(huì)向非標(biāo)記的細(xì)胞轉(zhuǎn)移，除非質(zhì)膜被破壞，比如切片部位。

二、 產(chǎn)品包裝

三、 操作說(shuō)明

制備儲(chǔ)液

固體染料以 DMF 或者 DMSO 或乙醇溶解配制為 1mM 的儲(chǔ)液。一旦制備為儲(chǔ)液需密封避光冷凍保存，保存期 6 個(gè)月。

標(biāo)記懸浮細(xì)胞

1.1  以無(wú)血清培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞密度為 1X10⁶ 個(gè)/mL。

1.2  每 1mL 細(xì)胞懸液加入 5μL 細(xì)胞標(biāo)記液，混勻。

1.3  置于37℃孵育 1~20 分鐘。不同的細(xì)胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時(shí)間可選擇 

20 分鐘，隨后再進(jìn)行優(yōu)化。

1.4  在37℃，1500rpm 5 分鐘離心標(biāo)記懸浮液。

1.5 去上清，用 37 度的培養(yǎng)基輕輕懸浮細(xì)胞。

1.6 重復(fù)兩次以上的洗滌步驟。

1.7 放置 10 分鐘后進(jìn)行熒光測(cè)量。

標(biāo)記貼壁細(xì)胞

2.1 培養(yǎng)細(xì)胞至所需的匯合度。

2.2 取出爬片，吸去培養(yǎng)基，放到蓋玻片濕盒中。

2.3 準(zhǔn)備標(biāo)記，每 1mL 新鮮培養(yǎng)基中加入 5μL 的標(biāo)記液。

2.4 吸取 100μL 蓋玻片周圍的染色介質(zhì)，輕輕鋪勻，使之蓋滿整個(gè)爬片。

2.5 在37℃孵育細(xì)胞，不同的細(xì)胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時(shí)間可選擇 20 分 

鐘，隨后再進(jìn)行優(yōu)化。

2.6 去掉染色介質(zhì)，用新鮮預(yù)熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，再更換以新的預(yù)熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，重復(fù)洗

滌蓋玻片三次。

表 1. 探針光譜特性