神經(jīng)元示蹤劑——羰化青 Dil

Cat number：KFS142

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For Research Use only

一、產(chǎn)品描述

長鏈二烷基羰花青化合物，特別是 Dil（MW：933.88），廣泛應用于固定和非固定的組織與細胞中，進行順行或逆行的神經(jīng)示蹤分析。

Dil 不會影響細胞的活力、生長以及基本生理特性。Dil 標記運動神經(jīng)元，可在培養(yǎng)基條件下持續(xù)跟蹤長達四周，在體內(nèi)長達一年。染料通過在質(zhì)膜中的緩慢橫向擴散均勻標記神經(jīng)元，0.2~0.6mm/每天/固定標本，在活體組織里，可以達到 6mm/每天。經(jīng)過醛固定的組織，Dil 的擴增可以持續(xù)長達 1~2 年。一般情況下未標記的染料不會向非標記的細胞轉(zhuǎn)移，除非質(zhì)膜被破壞，比如切片部位。

二、產(chǎn)品包裝

三、操作說明

制備儲液

固體染料以 DMF 或者 DMSO 或乙醇溶解配制為 1mM 的儲液。一旦制成的儲液，需避光冷凍，儲液形式可保存 6 個月。

標記懸浮細胞

1.1 以無血清培養(yǎng)基懸浮細胞密度為 1X10⁶ 個/mL。

1.2 每 1mL 細胞懸液加入 5μL 細胞標記液，混勻。

1.3 于37℃孵育 1~20 分鐘。不同的細胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇  

20 分鐘，隨后再進行優(yōu)化。

1.4 于37 度，1500rpm 5 分鐘離心標記懸浮液。

1.5 去上清，用 37 度的培養(yǎng)基輕輕懸浮細胞。

1.6 重復兩次以上的洗滌步驟。

1.7 放置 10 分鐘后進行熒光測量。

標記貼壁細胞

2.1 培養(yǎng)細胞至所需的匯合度。

2.2 取出爬片，吸去培養(yǎng)基，放到蓋玻片濕盒中。

2.3 準備標記，每 1mL 新鮮培養(yǎng)基中加入 5μL 的標記液。

2.4 吸取 100μL 蓋玻片周圍的染色介質(zhì)，輕輕鋪勻，使之蓋滿整個爬片。

2.5 于37 度孵育細胞，不同的細胞類型所用的孵育條件不一樣，可參考表格 1.初始孵育時間可選擇 20 分 

鐘，隨后再進行優(yōu)化。

2.6 去掉染色介質(zhì)，用新鮮預熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，再更換以新的預熱的培養(yǎng)基孵育 10 分鐘，重復洗滌 

蓋玻片三次。

表 1. 優(yōu)化的細胞染色孵育時間