細胞骨架綠色熒光探針 ActinGreen

Cat number：KFS143

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For Research Use only

一、產品描述

ActinGreen(熒光素鬼筆環肽)是 F-肌動蛋白的高親和力探針，由蘑菇毒素制成，與綠色熒光素 (FITC) 偶聯。 以納米摩爾濃度使用時，鬼筆毒素是方便的探針，可用于對甲醛固定和打孔的組織切片、細胞培養物或無細胞實驗體系中的 F-肌動蛋白的標記、鑒別和定量。

Ex/Em：496nm/516nm，比抗體染色更優越。適合于固定和通透的樣本。

ActinGreen 與肌動蛋白對于不同的物種，包括植物和動物具有幾乎相同的高結合屬性。鬼筆環肽結合具有高選擇性，而 F-肌動蛋白

熒光綠色熒光。呈現出很少的非特異性染色。本產品可以用于熒光顯微鏡、微孔板、比色皿和流式細胞儀。

二、產品包裝

三、操作說明染色操作

本實驗操作不特定針對某一特別的實驗體系，但是具有很大的普遍適用性。以下操作以貼壁細胞爬片為例。

甲醛固定細胞

1.1 以預溫的 PBS，pH7.4，洗滌細胞兩次。

1.2 3.7%甲醛固定細胞，室溫 10 分鐘。注意：甲醇可能導致肌動蛋白扭曲變形，因此避免選用任何含有甲醇類的固定劑。

1.3 PBS 洗滌兩遍。

1.4 丙酮-20 度洗滌蓋玻片或者含 0.1% Triton X-100 的 PBS 洗滌 3~5 分鐘。

1.5 PBS 洗滌兩遍。

1.6 5μL 甲醇原儲液加入 200μL 的 PBS 中預染色每張蓋玻片，加入 1%BSA 到染色液中，以減少非特異性背

景。同樣，在染色之前，也可以選擇用 1%BSA 的 PBS 預孵育固定的細胞。

1.7 染色液室溫浸泡蓋玻片 20 分鐘，可以加上封蓋，防止水分蒸發。

1.8 PBS 洗滌兩遍。

1.9 長期保存，細胞應在空氣中晾干，加蓋在一個封固封片劑。避光 2-8℃，以這種方式制備的試樣保持

至少 6 個月的肌動蛋白染色。

同時進行固定、促滲和熒光素鬼筆環肽染色

ActinGreen 在 4%的多聚甲醛固定緩沖液中穩定時間較短，需要快速的固定、透化和標記。

2.1 制備 1mL 含有 50~100μg/mL 的 1-十六酰-sn-丙三醇-磷酸膽堿和 3.7%的甲醛溶液，然后添加 5~10units 的熒光素鬼筆環肽。

2.2 染色液沒過細胞，4 度孵育 20 分鐘。

2.3 緩沖液快速洗滌三次后，封片觀察。