細胞骨架藍色熒光探針

Cat number：KFS144

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For Research Use only

一、產(chǎn)品描述

本染料是 F-肌動蛋白的高親和力探針，由蘑菇毒素制成，與藍色熒光染料偶聯(lián)。 以納米摩爾濃度使用時，鬼筆毒素是方便的探針，可用于對甲醛固定和打孔的組織切片、細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗體系中的 F-肌動蛋白進行標記、鑒別和定量。

Ex/Em：350nm/450nm，比抗體染色更優(yōu)越。適合于固定和通透的樣本。

熒光標記的鬼筆環(huán)肽與肌動蛋白對于不同的物種，包括植物和動物具有幾乎相同的高結(jié)合屬性。鬼筆環(huán)肽結(jié)合具有高選擇性，而 F-肌動蛋白紅色熒光。呈現(xiàn)出很少的非特異性染色。本產(chǎn)品可以用于熒光顯微鏡、微孔板、比色皿。

二、產(chǎn)品包裝

三、操作說明

染色操作

本實驗操作不特定針對某一特別的實驗體系，但是具有很大的普遍適用性。以下操作以貼壁細胞爬片為例。注：針對貼壁細胞或 96 微孔板樣本，每個樣建議100μL染色工作液體積，本試劑盒約可操作 80 tests。

甲醛固定細胞

1.1 以預(yù)溫的 PBS，pH7.4，洗滌細胞兩次。

1.2 3.7%甲醛固定細胞，室溫 10 分鐘。注意：甲醇可能導(dǎo)致肌動蛋白扭曲變形，因此避免選用任何含有甲醇類的固定劑。

1.3 PBS 洗滌兩遍。

1.4 丙酮-20 度洗滌蓋玻片或者含 0.1% Triton X-100 的 PBS 洗滌 3~5 分鐘。

1.5 PBS 洗滌兩遍。

1.6 5μL 甲醇原儲液加入 200μL 的 PBS 中預(yù)染色每張蓋玻片，加入 1%BSA 到染色液中，以減少非特異性背

景。同樣，在染色之前，也可以選擇用 1%BSA 的 PBS 預(yù)孵育固定的細胞。

1.7 選擇合適的染色液體積，建議 100μL，室溫浸泡蓋玻片 20 分鐘，可以加上封蓋，防止水分蒸發(fā)。

1.8 PBS 洗滌兩遍。

1.9 長期保存，細胞應(yīng)在空氣中晾干，加蓋在一個封固封片劑。避光 2-6℃，以這種方式制備的試樣保持至

少 6 個月的肌動蛋白染色。

同時進行固定、促滲和羅丹明鬼筆環(huán)肽染色

羅丹明鬼筆環(huán)肽在 4%的多聚甲醛固定緩沖液中穩(wěn)定時間較短，需要快速的固定、透化和標記。

2.1 制備 1mL 含有 50~100μg/mL 的 1-十六酰-sn-丙三醇-磷酸膽堿和 3.7%的甲醛溶液，然后添加 5~10units 的染料。

2.2 染色液沒過細胞，4 度孵育 20 分鐘。

2.3 緩沖液快速洗滌三次。

2.4 封片觀察。