DAPI

Cat number：KFS149

Store at 4℃

For Research Use only

 

一、 產品描述

DAPI 是一種藍色核酸染料，優先染 dsDNA，DAPI 表現為可集中結合在 DNA 雙鏈的 AT 小溝，結合后的 DAPI 熒光會發生 20 倍增強。同時，DAPI 也可以結合 RNA，與 DNA 不同，一般認為 DAPI 結合于 RNA 的 AU 區。DAPI/RNA 的復合體（500nm）有比 DAPI/dsDNA復合體（460nm）更長的熒光波長。DAPI 是一種常用的多色熒光技術中的核復染劑。他的藍色熒光可以與綠色、紅色、橙黃色探針形成鮮明對比。

 

二、 產品組份

 

組份	KFS149	儲存條件
DAPI	1 mg	4℃，避光

 

三、 操作說明

 

熒光顯微鏡貼壁細胞復染

樣品準備：根據需要固定樣本。DAPI 染色通常與其他染色步驟同時操作。注意：固定與促滲不是所有做復染的樣本都必須要做。

1.1  Equilibrate the sample briefly with phosphate-buffered saline (PBS).PBS 簡單平衡樣本。

1.2  1mL 去離子水溶解 5mg DAPI 可以得到 14.3mM 的 DAPI 儲液。

1.3  PBS 稀釋 DAPI 儲液至 300nM。加入約 300μL 稀釋后的 DAPI 染色液至樣品蓋玻片上，保證沒過樣本.

1.4  孵育 1~5 分鐘。

1.5  PBS 洗滌樣本幾次，去掉片子上多余的水分。

1.6  選取合適的濾光片觀察樣本。

 

流式細胞儀懸浮細胞復染

樣品準備：根據需要固定樣本。DAPI 染色通常與其他染色步驟同時操作。

2.1 收集細胞懸液調整數量至 2 × 105 to 1 × 106 cells.

2.2 離心收集細胞棄上清液。

2.3 室溫加入 1mL PBS 輕彈管壁，使之重懸。

2.4 將上述細胞懸液用移液器慢慢加入到 4mL 的無水乙醇后，zui大轉速渦旋混勻，將細胞放置于-20 度， 

5～15 分鐘。

2.5 離心收集細胞，去掉乙醇。

2.6 加入5mL PBS 重懸細胞，室溫放置 15 分鐘，使得細胞重新吸收水分。

 

復染操作

3.1 1mL 去離子水溶解 5mg DAPI 可以得到 14.3mM 的 DAPI 儲液。

3.2 配制染色緩沖液(100 mM Tris, pH 7.4, 150 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 0.1% Nonidet P-

40)，稀釋 DAPI 儲液至 3μM 的工作染色濃度。每一個染色反應大約需要 1mL 的 DAPI 染色工作液

3.3 接上 2.6 步，離心收集細胞，加入 1mL DAPI 染色工作液。

3.4 室溫孵育 15 分鐘。

3.5 直接上機分析。（如需進行熒光顯微鏡觀察，細胞可以離心后去掉上清，以新鮮緩沖液重新懸浮細胞，

吸取一滴懸浮液加到載玻片上，加蓋玻片后觀察。）樣品準備：根據需要處理樣本，1、蒸餾水簡單沖洗，去除緩沖液，后的沖洗可以有助于減少非特異性背景，再晾干。

 

染色質 FISH 復染

復染步驟

4.1 1mL 去離子水溶解 5mg DAPI 可以得到 14.3mM 的 DAPI 儲液。

4.2 PBS 稀釋 DAPI 儲液至 300nM。吸取 300μL 的染色液直接加到樣品上，加蓋玻片使染色液均勻分布于

樣本上。

4.3 避光室溫孵育 30 分鐘。

4.4 小心移去蓋玻片，PBS 或蒸餾水洗滌樣本，去掉多余染料。

4.5 加蓋玻片，用指甲油或中性樹脂封片，或根據需要用抗淬滅試劑封片。

4.6 選取合適的濾光片觀察樣本。