氯離子熒光探針 MEQ
Cat number：KFS173
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For Research Use o
一、產品描述
MEQ（MQAE）是一個 6-甲氧基花青苷衍生物，是細胞內的 Cl-熒光指示劑，該染料可以通過受被動擴散所控制的碰撞淬滅來檢測離子濃度。目前，檢測 Cl-所用熒光染料主要是 MQAE 和 SPQ，MQAE 相比 SPQ 來說對于 Cl-的濃度有更高的靈敏度和更高的熒光量子比率。
表 1.MQAE 光譜數據
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Ex |
Em |
e |
KSV |
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MEQ |
350 nm |
460 nm |
2800 cm-1M-1 |
200 M-1 |
隨著濃度增加，MQAE 的發射光譜
二、產品包裝
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組份 |
KFS173 |
儲存條件 |
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氯離子熒光探針 MEQ |
10mg |
-20℃，避光 |
三、細胞內 Cl-的測量
MQAE 的工作液可以配制于 Krebs-HEPES 緩沖液中。Krebs-HEPES 緩沖液即為 20mM HEPES，128mM NaCl，2.5mM KCl，2.7mM CaCl2，1mM MgCl2，16mM glucose，pH7.4。MQAE 標記細胞時的濃度通常為 5-10mM。以約 800-1000 萬細胞每毫升的細胞密度，在含有 5-10mM MQAE 的 Krebs-HEPES 緩沖液中孵育 30-60 分鐘。通常一個探針的裝載體系為 100 微升即可。隨后用 Krebs-HEPES 緩沖液或其它適當溶液洗滌5次左右，即可進行相應熒光測定。詳細的使用方法請參考相關文獻。
以下對胞內氯離子的熒光測量[Cl-]做簡要說明計算。Stem-Volmer 方程可以給出氯離子探針的熒光強度與氯離子濃度的關系：
(FO/F) – 1 = KSV[Q]
FO 是沒有鹵化物或其他淬滅離子時的熒光強度，F 是有淬滅劑時的熒光強度，[Q]是淬滅劑濃度，而 KSV 是 Stem-Volmer 方程常數。建議對實驗體系進行校準，以得到研究用細胞類型的指示劑探針的 Ksv，利用線性回歸模型分析 Stem-Volmer 方程。
Stem-Volmer 方程中的氯離子 Ksv 常數可以隨著碰撞淬滅的陰離子物質的增多而明顯降低，如多肽。便于校準，可以固定胞內氯離子的濃度，通過使用雙三丁基氧化錫和尼日利亞菌素 10~30μM。為了保證滲透壓使用陰離子不淬滅染料，取代氯離子，如葡萄糖酸。
