鉀離子 K+熒光探針 PBFI, AM

Cat number：KFS176

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For Research Use only

一、產品描述

Na⁺敏感型染料,SBFI 和 K⁺敏感型染料,PBFI，是鈉鉀離子濃度測定時所用到的選擇性熒光指示劑。這類苯并呋喃間苯二甲酸酯的衍生物以及其具有膜透性的乙酰氧基甲基酯形式（AM 酯）可以在生理條件（含多種其他一價陽離子）下，給予鈉鉀離子濃度以上時間及空間上準確的變化測量精度。

此外，這類染料的激光光譜可以選擇用與 Fura-2 類似的濾光器與檢測儀。.這些鈉鉀探針指示劑由熒光團與氮冠醚成環狀連接，賦予各自的配位體選擇性。在 pH7，且 Na 或 K 離子缺失的情況下，SBFI 和 PBFI 的消光系數大約在 42,000 cm^-1M^-1（346 nm）。一旦與離子結合，其激發峰顯著收窄，zui大激發峰向短波段偏移，光能量吸收比值變為 340nm/380nm。SBFI 結合 Na 離子之后熒光強度約增強 2.5 倍，但發射光譜zui大值基本不變。pH6.5~7.5，這類熒光素的光譜特性基本維持不變，相比較而言，離子濃度和粘度對其影響更大。

雖然這類離子指示劑有相當的選擇性，但對于 Na 離子親和的 SBFI 來說 K 離子同樣有一定的影響，PBFI 也是如此。在 K 離子生理濃度下，SBFI 對于 Na 的 Kd 值為 11.3mM，而沒有 K 離子存在時，則為 3.8mM。SBFI 對 Na 的選擇性比 K 要高出 18 倍。

同樣地，PBFI 對 K 離子的解離常數也強烈地依賴于 Na 的存在。Na 的是否存在，使得 PBFI 對于 K 離子的 Kd 從 100mM 到 10mM不等。雖然 PBFI 對于 K 離子的選擇性僅僅高出 Na 的 1.5 倍，但在細胞的生理條件下，通常 K 離子的濃度要高于 Na 的 10 倍以上。所以，在胞內加載探針時，這些探針的 Kd 值應與適當的載體做校準。

PBFI,AM 光譜特性：Ex/Em=380nm/500nm，分子量為 1171.11。

二、產品包裝

三、操作說明

用無水 DMSO 制備 PBFI AM 酯類的儲液，濃度為 10mM。PBFI AM 的相對分子量為 1171.由于這類 AM 酯形式的探針水溶性比較差，建議溶解時，使用必要的 Pluronic F-127.通常可以在進行加載探針到細胞之前，將探針的 DMSO 溶液與等體積 25%（w/V）的 Pluronic F-127 混合。探針加載濃度范圍：5μM~10μM，孵育時間 40 分鐘~4 小時。具體的加載條件能參考相關文獻或者實驗摸索，因為該探針在不同的細胞內的 Kd 值不同。校準細胞內 PBFI 使用 K+離子載體纈氨酶素。

一般來說，這些指示探針可以用340nm 激發光激發，但在380nm 熒光對于目的離子的濃度尤其敏感。發射峰的檢測可以設置在500nm，計算 N K⁺的濃度。