酸性磷酸酶(ACP)檢測試劑盒(Folin-酚比色法)

簡介：酸性磷酸酶 (acid phosphatase , ACP) 分布廣泛,遍布各種組織,主要存在于細胞的溶酶體內，所以常作為溶酶體標志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內質網和胞質內，各種動物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜pH為4.5～5.5。酸性磷酸酶是一個蛋白家族。

檢測原理是以磷酸苯二鈉作為底物，在酶促反應的zui適條件下采用每隔一定時間測定產物生成量的方法，通過Folin-酚(又稱福林酚)顯色，于分光光度計680nm處檢測吸光度，以酶促反應時間為橫坐標以產物生成量為縱坐標繪制進程曲線。曲線的起始部分在某一段時間內呈直線。該試劑盒主要用于組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內源性的酸性磷酸酯酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

組成：
試劑(A):Phenol(10mM)  1ml
試劑(B):樣品稀釋液    100ml
試劑(C):ACP assay buffer  15ml
試劑(D):ACP終止液   100ml
試劑(E):Folin-酚顯色液  15ml
使用說明書  1份

自備材料：蒸餾水;離心管或試管;水浴鍋;比色杯;分光光度計

操作步驟（僅供參考）：
1、準備樣品：
① 血漿、 血清和尿液樣品: 血漿、 血清按照常規方法制備后可以直接用于本試劑盒，尿液通常也可以直接用于測定，-20℃凍存，用于酸性磷酸酯酶的檢測。
②細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要需進行適當勻漿，離心取上清，-20℃凍存，用于酸性磷酸酯酶的檢測。
③植物樣品：取適量的植物組織加入少量生理鹽水或PBS，充分搗碎或研磨，靜置，用紗布或濾紙過濾，留取上請液并測量體積，-20℃凍存，用于酸性磷酸酯酶的檢測。
④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的酸性磷酸酶，可以使用樣品稀釋液稀釋10-20倍。

2、稀釋標準品
加入物                1     2      3       4      5
phenol（10mM）（ul）  50   100    150     200     250
蒸餾水（ul）          450   400   350     300     250
phenol濃度（mM）      0.04   0.08   0.12   0.16   0.2

3、ACP加樣：按照下表設置空白管、標準管、測定管、對照管(選做)，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產生氣泡。如果樣品中的酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測zui好能設置2平行管，求平均值。

4、ACP檢測：分光光度計，空白管調零，比色杯光徑1.0cm，檢測680nm處吸光度。

計算：根據測得的各待測樣品的吸光度，于標準曲線上查出相應的酚含量，乘以稀釋倍數后，換算為”nmol/ml·min”的活性單位。組織或植物粗酶液獲得率(ml)=上清液體積(ml)/組織或植物質量×

注意事項：
1、待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時需避免反復凍融。
2、建議每次測定時都做標準曲線，以使標準geng準確，另外標準品需避免反復凍融。
3、如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標儀測定。
4、所測樣本的值高于標準曲線的上限，應用ACP Assay buffer稀釋樣品后重新測定。
5、待測樣品中酸性磷酸酶活性較低時，可適當延長孵育時間至30min。
6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
有效期：6個月有效期。