產品名稱：ATPase染色液(鈣鈷法)

供應商：古朵生物

規格：5×50ml

保存：4℃,避光,6個月

三磷酸腺苷酶( adenosine triphosphatase，ATPase)是一種水解酶，是催化ATP合成的一種酶。三磷酸腺苷酶根據所用激活劑、抑制劑以及酶定位的不同分為膜性三磷酸腺苷酶、肌球蛋白三磷酸腺苷酶、線粒體三磷酸腺苷酶等。ATPase能水解三磷酸腺苷為磷酸腺苷和磷酸，此酶只作用于磷酸與磷酸之間的高能鍵，因而釋放大量能量。其催化反應如下：A-P-P-P + H2O→A-P-P + H3PO4 +能量ATPase染色(鈣鈷法)原理在于三磷酸腺苷酶水解三磷酸腺苷為二磷腺苷和磷酸，磷酸根與鈣離子結合為磷酸鈣沉淀，再依次被置換為磷酸鈷和硫化鈷，zui終產物為黑色硫化鈷沉淀。

產品組成：

名稱：Storage

規格：5×50ml  

試劑(A): 鈣鹽溶液       50ml        RT 避光

試劑(B): ATPase孵育液       50ml        4℃ 避光

試劑(C): 硝酸鈷溶液     50ml        RT

試劑(D): 中性福爾馬林       50ml        RT

試劑(E): ALP硫化溶液        2×1ml      RT 避光

試劑(F): ATPase對照液       10ml        4℃ 避光   

使用說明書      1份    

自備材料:

1、 蒸餾水

2、 恒溫箱

操作步驟(僅供參考)：

(一)石蠟切片染色

1、 石蠟切片脫蠟后，入蒸餾水。

2、 入鈣鹽溶液中，37℃溫箱5min。

3、 入ATPase孵育液，孵育2～4h。

4、 蒸餾水洗1min。

5、 入硝酸鈷溶液5min，入蒸餾水。

6、 入中性福爾馬林，室溫固定2min。

7、 流水沖洗2min。

8、 在上述過程中配制ALP硫化工作液，即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化

工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育2min。

9、 流水洗10min后，入蒸餾水。

10、 石蠟切片經95%乙醇溶液及無水乙醇脫水。

11、 二甲苯透明，樹膠封片。

(二)冰凍切片染色

1、 冰凍切片直接入蒸餾水。

2、 入鈣鹽溶液中，37℃溫箱5min。

3、 入ATPase孵育液，孵育40min。

4、 蒸餾水洗1min。

5、 入硝酸鈷溶液5min，入蒸餾水。

6、 入中性福爾馬林，室溫固定2min。

7、 流水沖洗2min。

8、 在上述過程中配制ALP硫化工作液，即取試劑(E)用蒸餾水稀釋50倍, 即為ALP硫化

工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育2min。

9、 流水洗10min后，入蒸餾水。

10、 甘油明膠封固。

染色結果：

酶所在陽性部位黑色硫化鈷沉淀    

陰性對照(可選)：

1、取對照切片，用試劑(F)-ATPase對照液進行孵育，并與用ATPase孵育液孵育的切片進

行比較。兩者反應相同部位可能有非特異性磷酸(單酯)酶存在，兩者不同部位才是ATP酶活

性所在。

2、將切片入80℃蒸餾水10min，再與其他組織切片同時孵育，結果應為陰性。

注意事項：

1、 ALP孵育液、ALP硫化液易失效，zui好分成小分儲存，一經開啟立即使用。

2、 ALP硫化液具有腐蝕性和刺激性氣味，應小心操作。

3、 對冰凍切片染色時，應減少切片在室溫暴露的時間。

4、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。