英文名稱:SP-Sepharose Fast Flow
儲(chǔ)存條件:2-8℃
單位:瓶
有效期:3年
產(chǎn)品說(shuō)明:分離試劑,層析介質(zhì)。平均顆粒大小:90?m;zui高流速:750cm/h;下游初步純化介質(zhì),高流速加上高載量,可快速純化大量粗產(chǎn)品。
規(guī)格:100mL保存:產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4°C~25°C(保存溶液為20%乙醇),通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存在4°C(20%乙醇加0.2mol/LNaAC)。
本產(chǎn)品避免與氧化劑接觸;避免在pH值<4時(shí)長(zhǎng)時(shí)間暴露(一周,20°C)。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:SP-瓊脂糖凝膠FF是將磺酸基丙基鍵合在高流速瓊脂糖微球上形成的一種強(qiáng)陽(yáng)離子交換介質(zhì)。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)雜質(zhì)。本產(chǎn)品具有高化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機(jī)械性能、可在位清洗、多次重復(fù)使用等特點(diǎn),非特異性吸附低,回收率高,適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn),適用于在pH工作范圍內(nèi)可形成正離子的生物大分子的分離純化,廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

操作說(shuō)明:
1.裝柱
(1)讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5)打開蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò),使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
2.平衡讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液,如NaAC、PBS等。
3.上樣(1)樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再配。
(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
(3)介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和pH值。鹽濃度小,介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附較牢。用SP瓊脂糖介質(zhì)時(shí),推薦的pH值是小于目標(biāo)產(chǎn)品等電點(diǎn)1個(gè)單位。
4.洗脫SP瓊脂糖介質(zhì)可用增大鹽濃度或增大pH值進(jìn)行洗脫,常用增大鹽濃度的辦法洗脫。
5.再生一般用高鹽濃度的緩沖液(含1~2mol/LNaCl)洗或增大pH洗10倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
6.在位清洗
(1)對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2MNacl去除。
(2)對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可用1MNaOH去除。
(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7.注意在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。
8.去熱源用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)。或用以下方法步驟去除:
(1)2倍柱體積的70%乙醇;
(2)2倍柱體積50mMTris-HclpH7.5;
(3)1倍柱體積4M尿素;
(4)3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1MNacl;以上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
9.消毒0.5~1MNaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。
注意:
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作。