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植物過氧化物酶(POD)提取試劑實驗方法

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  • 更新日期:2021-02-23 11:13
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中文名稱:植物過氧化物酶(POD)提取試劑
儲存條件:4℃,12個月
產品規格:500ml
產品用途:植物過氧化物酶(POD)提取液主要用于裂解植物組織,提取植物樣品中的過氧化物酶。該試劑僅用于科研領域,不宜用于臨床診斷或其他用途

產品簡介:過氧化物酶(peroxisome,POD)是以過氧化氫為電子受體催化底物氧化的酶,主要存在于細胞的過氧化物酶體中,以鐵卟啉為輔基,可催化過氧化氫,氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。該酶屬于細胞木質素合成途徑中間的關鍵酶,研究該酶可以探討多種生物細胞發育過程中木質素沉積的代謝機理,為減少水果石細胞含量提高其品質提供依據。

試劑:
(1)0.1%愈創木酚
(2)0.18% H2O2:取30%H2O2 3ml,蒸餾水定量至500ml
(3)標準母液:吸取 5% K2Cr2O7 1.2ml和純化的10%Co(NO3)2 溶液50ml,混合后加蒸餾水稀釋7倍,即為每毫升相當于6.75μg四鄰甲氧基苯酚標準母液

方法步驟:
(1)標準曲線的制作:取20ml具塞試管6支,編號,按下表配制四鄰甲氧基苯酚標準系列溶液,混勻后以1號管調零,于470 nm波長下測定吸光度,以標準液濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標繪制標準曲線。或用計算器求出吸光度(Y)隨標準液濃度(X)變化的線性回歸方程。
2)POD的提取:取待測植物樣品(如葉片等),剪碎混勻,稱取0.5?1.0 g于研缽中,加少量 石英砂、CaC03和適量蒸餾水,冰浴研磨勻漿,蒸餾水定zui至50 mL,搖勻后離心,上清液即為待測酶液。

(3)POD活性測定:取20mL具塞試管6支,3支測定(3個重復),3支空白對照。各加入酶液1.0 mL,0.1%愈創木酚1.0 mL,蒸餾水6.9 mL,搖勻,加入0.18% H202 1.0 mL(空白管不加,多加1.0mL蒸餾水),搖勻(計時),25℃下準確反應10 min,加5%偏磷酸0.2 mL終止反應。用標準曲線1號管調零,于分光光度計上測定3支測定管和空白對照管的A470。

計算公式

式中,X為測定管四鄰甲氧基苯酚的含量(mg);X0為對照四鄰甲氧基苯酚的含量(μg);Vt為酶液總體積(mL);FW為樣品鮮重(g);Vs為測定時取酶液的量(mL);t為酶作用的時間(min)。
 
 
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