中文名稱(chēng)：MTT溶液(5mg/ml)
產(chǎn)品規(guī)格：5mL|10mL
用途：又稱(chēng)四氮唑鹽，常用于細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)
注意事項(xiàng)：主要由MTT\四氮唑鹽組成。
儲(chǔ)存條件：-20℃，避光，12個(gè)月

簡(jiǎn)介：MTT比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。MTT檢測(cè)原理在于活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色Formazan并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。在特定溶劑(如DMSO)存在的情況下，可以被完全溶解。然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定570nm波長(zhǎng)附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。

操作步驟：
1、細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無(wú)需消化)。
2、低速離心，收集細(xì)胞沉淀。
3、用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。
4、細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，一般接種密度為3000～10000 /孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加3000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入6000個(gè)細(xì)胞即可。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。
5、37℃5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng)6～24h。
6、按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予0～20μl干預(yù)藥物處理，37℃5%CO2繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。
7、棄培養(yǎng)液，每孔加入MTT solution和新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育。
8、棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO，置搖床上低速振蕩，使結(jié)晶物充分溶解。如果紫色結(jié)晶較小或較少，溶解的時(shí)間會(huì)短一些。如果紫色結(jié)晶較大或較多，溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。
9、在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀570nm測(cè)定各孔吸光度。


注意事項(xiàng)：
1、MTT+solution(5mg/ml)盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。
2、由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)注意蒸發(fā)問(wèn)題。