【產品名稱】DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)
【規格】10ml
【分類】細胞其他
【儲存條件】-20℃,6個月
【用途】轉染DNA到細胞中
【注意事項】主要由DEAE-葡聚糖、TBS組成。
簡介:將DNA導入細胞的方法很多,采用DEAE-葡聚糖轉染法主要優點是相對簡單、快速、同次試驗內和不同次實驗間的重復性較好,該法尤其適用于瞬時轉染。DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)采用特殊溶劑溶解,經過濾除菌,臨用前37℃保溫并充分混勻。
操作步驟(僅供參考):
1、取對數生長期的細胞,制備成細胞懸液。將細胞密度調整到5×105個/ml接種至6孔板,培養12~24h。
2、用蒸餾水或TE將質粒DNA稀釋,將DNA溶液直接加到轉染培養液至其終濃度為1.0μg/ml。
3、將DEAE-葡聚糖溶液(10mg/ml)預熱并顛倒混勻,加到DNA/轉染培養液使DEAE-葡聚糖終濃度為100μg/ml,蕞適濃度需要自行摸索。
4、將50~70%匯片的細胞培養物中的培養液輕輕吸出,換上適合體積的補充有DEAE-葡聚糖/DNA/轉染培養液孵育。
5、倒置顯微鏡下觀察細胞,細胞內會出現顆粒,有的細胞核出現固縮,有的細胞邊緣出現部分破碎。有效的DEAE-葡聚糖轉染常伴有25~75%的細胞死亡。
6、換用100mmol/L氯喹培養液繼續培養,進行下游實驗。
注意事項:
1、某些特點細胞需要較長的轉染時間,因為氯喹有細胞毒性,可在轉染的蕞后時期加入。
2、轉染時,搖動細胞可保障轉染效率均一,蕞適轉染時間需通過實驗確定。
3、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
