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磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒操作步驟

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  • 更新日期:2021-04-27 16:52
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詳細(xì)介紹
中文名稱:磷酸鈣法細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
英文名稱:Calcium Phosphate Cell Transfection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:200T
儲存條件:-20℃,有效期12個月。
用途:用于磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞,適合于大多數(shù)貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染

本試劑盒是在傳統(tǒng)的磷酸鈣細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法的基礎(chǔ)上進行了改良,提高了轉(zhuǎn)染效率,并降低了毒性。用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞,不僅可以瞬時表達,也可以篩選穩(wěn)定株。本試劑盒足夠轉(zhuǎn)染不少于200個細(xì)胞樣品。

試劑盒組分:
BBS溶液————————20ml
氯化鈣溶液———————20ml

HEK293或HEK293T細(xì)胞,即通常所謂的293細(xì)胞,是蕞適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染的細(xì)胞之一,優(yōu)化條件后轉(zhuǎn)染效率可以高達90%以上;通常很容易達到40-50%左右的轉(zhuǎn)染效率。大多數(shù)常見的細(xì)胞例如Hela細(xì)胞、CHO細(xì)胞等也都適合磷酸鈣法轉(zhuǎn)染,但效率比293細(xì)胞要略低一些。

本試劑盒不僅適合于大多數(shù)貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染,也適用于一些懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。本試劑盒提供的試劑都經(jīng)無菌處理,可以直接使用。

注意事項:
1. 轉(zhuǎn)染時,把DNA-氯化鈣溶液加入到BBS溶液中,不要把BBS溶液加入到DNA-氯化鈣溶液中。
2. 高純度的質(zhì)粒是獲得高轉(zhuǎn)染效率的必要條件,要確保A260/A280大于1.8,并且電泳檢測抽提到的質(zhì)粒90%以上都是超螺旋。
3. 在用磷酸鈣法轉(zhuǎn)染細(xì)胞時應(yīng)使用濃度不高于5%的二氧化碳,二氧化碳的蕞佳濃度為3%左右。
4. BBS溶液的pH值直接關(guān)系到轉(zhuǎn)染效率,盡量避免把BBS溶液長時間暴露在空氣中,以免被空氣中的二氧化碳酸化。
5. 轉(zhuǎn)染時由于質(zhì)粒不同、細(xì)胞不同,蕞佳的質(zhì)粒用量需自行摸索。
 
 
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