中文名稱：DEAE-Dextran細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒
英文名稱：DEAE-Dextran Transfection Kit
產(chǎn)品規(guī)格：200T
儲存條件：-20℃，有效期12個月。
用途：轉(zhuǎn)染DNA到細(xì)胞中

本試劑盒是一種適合于把DNA轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)的真核細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染試劑盒。對于六孔板而言，一個包裝的本轉(zhuǎn)染試劑如使用常規(guī)方法可以轉(zhuǎn)染2500個孔，如使用預(yù)處理方法可以轉(zhuǎn)染200個孔。

試劑盒組分：
DEAE-Dextran溶液————20ml
10×PBS—————————20ml
氯喹溶液————————3.5ml

關(guān)于DEAE-dextran的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法早在1968年就有相關(guān)論文發(fā)表。DEAE-dextran可以促使DNA結(jié)合到細(xì)胞膜上，然后通過內(nèi)吞作用(endocytosis)進(jìn)入細(xì)胞。基于DEAE-dextran的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法適用于瞬時轉(zhuǎn)染(transient tranfection)，但不適用于篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株。DEAE-dextran在較高濃度作用較長時間會對細(xì)胞產(chǎn)生一定毒性。

目前基于DEAE-dextran的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法有兩種，一種方法為把DNA和DEAE-dextran混合后加入到細(xì)胞中，另一種方法為先用DEAE-dextran預(yù)處理細(xì)胞，然后再加入DNA。后一種方法是在前一種方法的基礎(chǔ)上經(jīng)過改進(jìn)而產(chǎn)生的，對于一些細(xì)胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB細(xì)胞等，后一種方法可以增加細(xì)胞對DNA的攝入量，顯著改善轉(zhuǎn)染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶體對外源DNA的降解，從而提高轉(zhuǎn)染效率。但對于具體的細(xì)胞、具體的培養(yǎng)條件，如需獲得geng加理想的轉(zhuǎn)染效率，必須自行摸索上述各種轉(zhuǎn)染方法，找出優(yōu)化的轉(zhuǎn)染方法。

基于DEAE-dextran的細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法不僅可以轉(zhuǎn)染貼壁細(xì)胞，也可以轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞。轉(zhuǎn)染效率可以通過轉(zhuǎn)染表達(dá)EGFP或其它熒光蛋白的質(zhì)粒進(jìn)行快速鑒定。

注意事項(xiàng)：
1. 使用高純度的DNA或RNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。對于質(zhì)粒，可以使用百奧萊博的質(zhì)粒大量抽提試劑盒(YT003)進(jìn)行抽提，以保證獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。
2. 轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長狀態(tài)。
3. 試劑盒中各試劑均經(jīng)過無菌處理，可以直接使用。在細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程中要嚴(yán)格注意無菌操作。
4. 需自備用于洗滌的PBS或HBSS，以及用于稀釋10XPBS的無菌水。
5. 稀釋或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用試劑盒中提供的10XPBS稀釋。
6. 氯喹溶液對人體有害，請注意適當(dāng)防護(hù)。

儲存條件：4℃，有效期1年。