中文名稱:普魯士藍染色液(核固紅法)
產品規格:2×50mL|2×100mL
用途:組織三價鐵染色,含鐵血黃素染色
注意事項:又稱Perls染色液,或者柏林藍反應。染色結果為:三價鐵或含鐵血黃素呈藍色,其他呈紅色。推薦采用該法作為含鐵血黃素的主要染色法。
儲存條件:室溫,避光,12個月
產品概述:
含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素,為金黃色或棕黃色顆粒,因其含鐵,且為金黃色,故稱為含鐵血黃素。當紅細胞被巨噬細胞吞噬后,在溶酶體酶的作用下,血紅蛋白被分解為不含鐵的橙色血質和含鐵的含鐵血黃素。Perls普魯士藍反應(Prussian blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經過亞鐵qing化鉀和稀酸處理后可以產生藍色,常見于吞噬細胞或間質內,其染色原理在于亞鐵qing化鉀溶液使三價鐵離子從蛋白質中被稀鹽酸分離出來,三價鐵與亞鐵qing化鉀反應,生成一種不溶解的藍色化合物即三價鐵的亞鐵qing化物。 普魯士藍染色用于顯示局部組織內的各種出血性病變,常見于吞噬細胞內,可以很好地區分含鐵血黃素與其他色素。該染色液穩定性好、可以長期保存、不易產生沉淀、應用范圍廣,可以進行復染。該染色液的復染液采用核固紅,是jing典、常用的復染液。
使用方法:
(一)石蠟切片染色:
1、組織固定于10%中性福爾馬林,常規脫水包埋。
2、切片厚度4μm,常規脫蠟至水。
3、蒸餾水水洗1min。
4、切片入Perls stain(見注意事項2),浸染15~30min。
5、蒸餾水充分沖洗2~5min。
6、入核固紅染色液,淡染細胞核5~10min。
7、自來水沖洗1~5s。
8、常規脫水透明,中性樹膠封固
(二)冰凍切片染色:
1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗2~3min。
2、染色、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時間可以相應縮短。
(三)細胞染色:
1、4%多聚甲醛固定10~20min。
2、自來水沖洗2次,每次2min。
3、蒸餾水沖洗2次,每次2min。
4、染色、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,但操作時間應相應延長。
染色結果:
含鐵血黃素或三價鐵 藍色
細胞核、其他組織 紅色
陰性對照:取相同切片脫蠟至水。入5%草酸孵育2~6h,經Perls stain,其余步驟同上。結果為陰性。
注意事項:
1、切片脫蠟應盡量干凈。組織固定常采用10%中性福爾馬林,經普通福爾馬林長期固定后,組織會有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會妨礙鐵的保存。
2、整個操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時以蒸餾水為宜,因普通水內含鐵質。Perls stain染色時,應根據樣本情況調整著色時間。
3、所有切片都應使用同一個陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個很好的對照,包含相當數量的鐵陽性巨噬細胞(心衰細胞)。
4、冰凍切片和細胞染色,好根據具體情況摸索實驗條件。
