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葡聚糖凝膠G-10實驗步驟,CAS:9041-37-6

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  • 更新日期:2021-11-04 14:56
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詳細介紹

產品名稱:葡聚糖凝膠 G-10
英文名稱:Sephadex G-10
CAS:9041-37-6
分子式:C13H10BrN3O2
分子量:320.1414
規格:25g 100g 500g
性    狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結構成分:交聯葡聚糖
粒    徑: 40-120μm
工作PH值:2-13
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:≤700
保存條件:4-25℃
應    用:利用分子篩作用,進行緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子

葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。

葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細級的葡聚糖凝膠是用于需要極高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外,粗級也可用于批量工藝。

葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩定的,在強酸中凝膠骨架的糖昔鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應避免使用。

葡聚糖疑膠并不熔融,可以在濕態、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯度。

使用方法:
1. 葡聚糖凝膠G-10預處理:
在室溫下,將葡聚糖凝膠干粉浸泡于蒸餾水中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,或者用熱水浸泡(不建議煮沸)至少1小時直至充分溶脹,凝膠體積不再變化。
注:在溶脹前,加入蒸餾水攪拌后使其自然沉降,沉降后若上層溶液中漂浮的凝膠碎片顆粒較多,需要重復多次漂洗將其除去,防止層析時阻塞凝膠柱,影響流速。

2. 裝柱:
將溶脹好的凝膠根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層; 裝柱要均勻,可在凝膠耐受的操作壓下裝柱,裝好的凝膠柱可以檢測柱效,檢測過濾柱裝填是否合格。
凝膠層析分離度取決于柱高,為分離不同組分,凝膠柱床必須有適宜的高度:分級分離時,一般需要 100cm 左右長的層析柱,柱高與直徑之比為 20:1-100:1,柱高過高時,凝膠擠壓變形阻塞會引起較大的反壓,應當盡可能避免;分組分離(例如脫鹽)時用短柱,柱高控制在40-50cm 以下,柱高與直徑的比約為 5:1-10:1。

3. 平衡:
上樣前用平衡液平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(例如流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值);

4. 上樣:
分級分離時上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積。
樣品溶液如有雜質或沉淀應過濾或離心除去,樣品的粘度不能過高,否則影響分離效果。

5. 洗脫方法:
可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱緩沖液中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化;

6. 在位清洗(CIP)
凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。 方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向清洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。

7. 保存
凝膠柱暫時不用,可將其回收,一般方法是將凝膠用水沖洗干凈濾干,可加入0.02%疊dan化鈉防腐或用20%乙醇浸泡,以控制微生物生長。

 
 
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