中文名稱：NP-40裂解液
分    類：蛋白提取
規    格：100ml
保存條件：—20℃,12個月
用    途：裂解細胞提取總蛋白質,主要用于Western,免疫沉淀,免疫共沉淀等
注意事項：主要由NP-40、氯化鈉、Tris組成,NP-40為常用的去污劑之一。含有一支1.5ml PMSF。

簡介：
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細胞組織裂解液。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的Western、IP和co-IP等。主要成分為50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。

使用方法：
A． 對于培養細胞樣品：
取適當量的RIPA裂解液混勻，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。

B．對于貼壁細胞，
去除培養液用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。輕輕的搖晃約5-10 min。充分裂解后，10000-14000g離心10 min，取上清，即可進行后續操作。

C． 對于懸浮細胞：
離心收集細胞，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍.加入適量裂解液,用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈或旋渦震蕩5-10 min以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝然后再裂解。充分裂解后，10000-14000 g離心10 min，取上清，即可進行后續操作。

D．對于組織樣品：
1)  手術切除的組織塊迅速置于預冷的生理鹽水中，漂洗數次，以清潔表面的血跡，將組織稱量后切成幾個較小的組織塊放入組織勻漿器中。
2)  取適當量的RIPA裂解液混勻，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
3)  按組織凈重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相應體積的裂解液進行勻漿(如果裂解不充分可以適當添加多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品， 可以適當減少裂解液的用量) 。
4)  用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5)  充分裂解后，10000-14000 g離心3- 5 min，取上清，即可進行后續作。

注意事項：
1)  抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。建議將樣品分裝成合適的量，然后冷凍干燥或直接以液體狀態置-20℃中保存，不要反復凍融。
2)  需自備PMSF。建議在臨用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的終濃度為1 mM。
3)  為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。