產(chǎn)品名稱(chēng)：細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白提取試劑盒
規(guī)格：50T/100T
分類(lèi)：蛋白提取
儲(chǔ)存條件：4℃,12個(gè)月
注意事項(xiàng)：裂解細(xì)胞提取細(xì)胞核蛋白與細(xì)胞漿蛋白

一、試劑盒說(shuō)明  
本試劑盒用于從哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取核蛋白和/或胞漿蛋白，提取制備過(guò)程簡(jiǎn)便。制備的核蛋白和胞漿蛋白能保持天然活性，并且純度較高。提取的蛋白可用于進(jìn)一步的轉(zhuǎn)錄因子活性分析、凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性測(cè)定等后續(xù)蛋白質(zhì)研究。

操作步驟
Ⅰ實(shí)體組織蛋白的提取
1、組織樣本，將組織剪切成小塊，加入適量的冰冷PBS均漿后，靜置5 min ，棄沉淀，小心吸取上清轉(zhuǎn)移至另一離心管中；
2、上清4℃離心500×g，3 min，棄上清，估計(jì)細(xì)胞壓積PCV（離心后的緊實(shí)細(xì)胞體積）；
3、每20μL細(xì)胞壓積中，加入200μL預(yù)冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑】，大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩5s，放置冰上1min；
5、再次大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩5s后， 4℃離心，16000×g,5min；
6、盡快將上清轉(zhuǎn)入另一預(yù)冷的潔凈微量離心管，置于冰上，即得胞漿蛋白；
7、在離心沉淀物（細(xì)胞核）中加入100μL預(yù)冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑)，大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上40min，每間隔10 min渦旋劇烈振蕩15 seconds；
8、4℃離心，16000×g,,10min，盡快將上清轉(zhuǎn)入一預(yù)冷的潔凈微量離心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞漿蛋白和核蛋白進(jìn)行蛋白定量（Braford法或BCA法），分裝并保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。

Ⅱ  培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1、取培養(yǎng)細(xì)胞5×106～1×107個(gè)/mL，4℃離心，500×g,3 min收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，用預(yù)冷的PBS洗滌兩遍；
2、用移液槍盡可能取去上清，勿留殘液，估計(jì)細(xì)胞壓積PCV（離心后的緊實(shí)細(xì)胞體積）；
3、每20μL細(xì)胞壓積中，加入200μL預(yù)冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑】，大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩5s，放置冰上1min；
5、再次大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩5s后， 4℃離心，16000×g,5min；
6、盡快將上清轉(zhuǎn)入另一預(yù)冷的潔凈微量離心管，置于冰上，即得胞漿蛋白；
7、在離心沉淀物（細(xì)胞核）中加入100μL預(yù)冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制劑)，大轉(zhuǎn)速渦旋劇烈振蕩15s，放置冰上40min，每間隔10 min渦旋劇烈振蕩15 seconds；
8、4℃離心，16000×g,,10min，盡快將上清轉(zhuǎn)入一預(yù)冷的潔凈微量離心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞漿蛋白和核蛋白進(jìn)行蛋白定量（Braford法或BCA法），分裝并保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。

注意事項(xiàng)
1、所有的試劑及器具均需預(yù)冷后使用；
2、細(xì)胞的數(shù)量不應(yīng)少于0.5×107個(gè)/mL；，     
3、以上各緩沖液的使用量是以20μL細(xì)胞壓積為例